中药平颤方加褪黑素对pd模型大鼠行为和前脑多巴胺及其代谢的影响

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1、中药平颤方加褪黑素对PD模型大鼠行为和前脑多巴胺及其代谢的影响：严丽荣高放周亚平侯莉苗曼悌许豪勤陈艳许庆狄荣科【摘要】目的观察中药平颤方加褪黑素（MT）对N甲基4苯基1,2,3,6四氢吡啶（MPTP）所致帕金森病（PD）模型大鼠行为学和前脑多巴胺(DA)及其代谢产物含量的影响，探讨中药与MT联合治疗PD的疗效及作用机制。方法SD大鼠60只，分5个组：对照组、模型组、MT组、中药组、中药+MT组。模型组和各治疗组大鼠腹腔注射MPTP建立PD模型，用爬杆法和迷宫实验测量大鼠行为学改变和智力状况，用高

2、压液相电化学法测定前脑DA、高香草酸（HVA）及二羟基苯乙酸（DOPAC）含量。结果PD模型大鼠出现不同程度爬杆能力下降和智力减退，与模型组相比各治疗组大鼠行为学异常可部分改善（P＜0.01）；模型组DA、HVA、DOPAC含量均较对照组显著降低（P＜0.01），各治疗组DA、HVA、DOPAC含量较对照组低，但较模型组明显增高（P＜0.05，P＜0.01）。结论平颤方与MT联合通过调节大鼠前脑DA神经元活性从而改善PD症状。【关键词】中药平颤方；褪黑激素；多巴胺；帕金森病近年研究认为帕金森病(PD)发病

3、与黑质多巴胺(DA)神经元氧化应激变性有关，使黑质纹状体通路内源性DA的含量异常〔1，2〕。临床应用左旋多巴替代内源性DA的缺乏疗效不佳，大多数病人服药一段时间后疗效减退，出现运动障碍、智力减退和精神症状等副作用〔3，4〕。中医认为本病属“颤证”范畴，因肝肾亏虚所致，采用滋肾养肝、化痰祛瘀通络的方法，可有效抵抗氧化应激的毒副作用，起到治疗性神经保护作用〔3～5〕。本文比较观察平颤方+褪黑素(MT)对PD大鼠脑内DA含量及其代谢产物的影响，探讨联合治疗PD的效果及作用机制。1材料与方法1.1动物分组及建模雄

4、性（SD)大鼠，体重(255～305)g（鼠龄6～8g/ml，30mg/kg腹腔注射，1次/d，共7d。再用爬杆法进行筛选，筛选48只PD模型(1.5～2.0分)大鼠进入实验；随机抽取36只作为治疗组（中药组、MT组、中药组+MT组，每组各12只），其余12只为模型组。1.2爬杆实验和迷宫实验各治疗组和模型组大鼠于末次注射MPTP及用药/水后7、14、21d，进行爬杆试验，每只大鼠允许爬杆3次，计算平均分。爬杆实验用直径35mm、高1000mm的光滑不锈钢管，垂直竖立，将大鼠头向下放置在金属杆的顶部，使其

5、沿杆自然爬下，观察动物在下行过程中的行为，并按标准计分，评分标准如下：四肢并用，一次顺利从杆上爬下为0分；一步一步螺旋向下爬行但兼有后肢滑行行为为0.5分；上杆后间歇停顿数次后爬下，但可抱紧金属杆为1分；滑行后掉落为1.5分；不能抓杆，直接掉落为2.0分。同时对所有动物进行“T”形迷宫实验，测定动物智力状况，每只大鼠走迷宫3次，计算平均错误次数。1.3中药平颤方及治疗中药平颤方由银杏叶、黄芪、天麻、白芍、钩藤、连翘、生甘草、野葛根、大叶红景天、黄连等组成，制成浓缩煎剂。每日20:00时胃饲中药平颤方煎剂3

6、ml（相当于中药10g），同时腹腔注射MT10mg/kg，连续治疗21d；模型组，每日同时胃饲3ml生理盐水和腹腔注射1ml生理盐水。1.4前脑组织生化DA及其代谢产物测定治疗21d后，断椎法处死大鼠，取右侧脑，迅速于冰上沿视交叉前方做横切面分离前脑，置于匀浆器中，加入1ml预冷的氯乙酸，制成匀浆。置于台式冷冻离心机中11000r/min离心30min，留取上清液，用高压液相电化学法测定DA及其代谢产物高香草酸（HVA）和二羟基苯乙酸（DOPAC），均以ng/g脑湿重计量。1.5试剂与仪器MT为Sigma

7、公司产品，使用前先用无水乙醇溶解，然后加生理盐水稀释,MT浓度3mg/L，无水乙醇浓度小于0.5％(v/v)。MPTP、DA、DOPAC、HVA、辛烷磺酸钠盐均为Sigma公司产品，其余试剂为国产分析纯试剂。高效液相电化学检测系统：E）。1.6统计学分析数据用x±s表示，用SPSS10.0软件，多组间比较采用方差分析。2结果2.1PD大鼠智力状况改变模型大鼠出现不同程度的行为智力和运动障碍，表现为动作迟缓、震颤、竖毛，对外界刺激反应低下。用药治疗后症状改善或消失，“T”型迷宫实验错误次数减少；随着治疗时

8、间延长，动物智力恢复明显（表1）。2.2PD大鼠行为改变注射MPTP后60min，大鼠协调能力开始降低，下滑加快，甚至不能抱杆、坠落。持续注射MPTP7d，爬杆实验测定，选择1.5～2.0分大鼠为模型组和治疗组(表2)。造模后治疗组协调能力逐渐恢复，症状改善，与模型组比较，治疗组行为恢复明显(表2)。表1各组大鼠迷宫试验智力测定与对照组比较：1)P＜0.05，2)P＜0.01；与模型组比较：3)P＜0.05，4)P＜0.01，