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1、糖尿病大鼠肾脏细胞外基质金属蛋白酶诱导因子和基质金属蛋白酶2的表达论文倪海锋，邓红，樊翔，李懿萍，李海浪，陈平圣［摘要］目的：研究糖尿病大鼠肾脏组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)和基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达，探讨糖尿病肾病的发病机制。方法：将SD大鼠随机分成正常对照组(NC组)和糖尿病模型组(DM组),DM组腹腔注射链脲佐菌素(55mgkg-1)诱导糖尿病大鼠模型，于第4、第8周分批处死大鼠.freelatrixmetalloproteinaseinducer(EMMPRIN)andmatr
2、ixmetalloproteinase2(MMP2)indiabeticrat’skidneys.MethodsRatdiabeticmodelgkg-1),andkidneysinedpathologicallyandtheexpressionofEMMPRINandMMP2munohistochemistry.TheintensityofEMMPRINandMMP2agingquantitativeanalysistechnique.ResultsEMMPRINandMMP2ainlyexpressedinthe
3、mesangialcells,endothelialcells,podocytes,parietalepithelialcellsofBoan’scapsule,andtubularcells.TheexpressionofEMMPRINandMMP2eruliofdiabeticratsthanthatofthecontrolanimals(P0.05).ConclusionExpressionofEMMPRINandMMP2inglomeruliismarkedlydecreasedindiabeticrats,
4、entofdiabeticnephropathy.Keyellitus；extracellularmatrixmetalloproteinaseinducer;matrixmetalloproteinase2;expression;rats糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)是糖尿病(diabetesmellitus,DM)的严重慢性微血管并发症，基底膜增厚、系膜细胞增生、系膜区细胞外基质(ECM)增多是其特征性的病理改变。众多细胞因子、生长因子表达异常在DN发生发展中起重要作用。既往对ECM产
5、生增多的原因研究较多，而关于ECM降解方面的报道相对较少。基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinase2,MMP2)是肾脏中ECM的主要降解酶之一［1］，而肾脏中MMP的调节机制尚不清楚。细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellularmatrixmetalloproteinaseinducer,EMMPRIN)参与细胞细胞或细胞间质的粘附，能显著地诱导临近间质细胞基质金属蛋白酶(MMPs)的产生，影响ECM的降解［2］。近年来，国内外对EMMPRIN的研究主要集中在肿瘤浸润和转移方面，但
6、它在DN发病中的作用却少有报道。本研究利用免疫组化法检测DM大鼠肾组织中EMMPRIN及MMP2的表达，旨在探讨EMMPRIN及MMP2和DM肾脏病变的关系，为DN的早期诊断及防治提供实验依据。1材料与方法1.1材料SD健康雄性大鼠（体重200～250g）购自东南大学医学院动物实验中心，链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)购自美国Sigma公司，血糖测定采用美国强生ONETOUCHEⅡ快速血糖检测仪，兔抗大鼠多克隆抗体MMP2及EMMPRIN购自武汉博士德公司，SP6001免疫组化检测试剂盒购自北京中山
7、生物工程有限公司。1.2方法1.2.1动物造模及处理SD大鼠36只，随机分为正常对照组(NC组,.freelolL-1、pH4.6）稀释成1%溶液，按55mgkg-1单侧腹腔一次性注射，以注射72h后血糖持续高于16.7mmolL-1为DM模型建立成功。两组大鼠自由进食饮水，实验中不予任何降血糖药物。1.2.2实验标本的收集各组分别于第0、４、８周末检测大鼠血糖、体重，用代谢笼留取24h尿标本，测尿量。同时于第0、４、８周末各组分别处死6只大鼠，取左肾称重，左肾与体重的比值作为肾脏肥大程度的指标。大鼠肾脏经10%福尔
8、马林多聚甲醛固定,按梯度酒精脱水，石蜡包埋，切片，HE染色。1.2.3免疫组化染色二步法免疫组化，肾组织石蜡切片常规脱蜡水化，3%的去离子H2O2孵育10min，一抗为兔抗鼠EMMPRIN(1∶50)、MMP2（1∶50），4℃孵育过夜，二抗为辣根酶标记的羊抗兔IgG，DAB显色,苏木素复染,脱水透明封片。以PBS代替一抗作为空白对照。光镜观察
