肿节风药材采收部位与最佳采收期的研究

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1、肿节风药材采收部位与最佳采收期的研究李成仁王园园李小艳宋晓虹韦琪生蒋林叶创兴【摘要】目的确定肿节风药材的采收部位与最佳采收期。方法分别将采得的不同季节肿节风药材分为根、茎、叶3部分，以60%乙醇为溶剂回流提取。采用高效液相色谱法测定不同季节肿节风药材各部位中反丁烯二酸和异嗪皮啶的含量；以紫外分光光度法测定其总黄酮的含量。结果肿节风药材叶中总黄酮含量最高，茎中反丁烯二酸含量最高，根中异嗪皮啶含量最高，综合考虑3种有效成分，以6月、8月含量最高。结论6月、8月份为肿节风药材的最佳采收期，以全株采收为宜。

2、【关键词】肿节风药效成分采收期采收部位肿节风为金粟兰科植物草珊瑚Sarcandraglabra(Thunb.)Nakai的干燥全草，又名九节茶、接骨木等，主要分布于我国华南、华东、西南各省区，在朝鲜、日本、东南亚和印度也有分布。《中国药典》2005年版（Ⅰ部）中记载其具有清热凉血、活血消斑、祛风通络的功效，可用于治疗血热紫斑、紫癜、风湿痹痛、跌打损伤等症〔1〕。现代药理学实验表明，肿节风具有抗菌消炎、抗肿瘤等作用，已制成各种剂型用于各种炎症和癌症的辅助治疗。其主要药效成分为反丁烯二酸、异嗪皮啶和黄酮

3、类化合物〔2〕。肿节风中反丁烯二酸和异嗪皮啶的含量可采用高效液相色谱法进行测定〔3，4〕，黄酮类化合物可通过紫外分光光度法测定〔5〕。本实验采取3种药效成分同时考察的方法，对不同生长季节的肿节风以及不同部位药用价值进行评估，为肿节风药材的采收提供依据。　　1仪器与试药　　1.1仪器erck公司），磷酸（色谱纯，Fluka公司），Mili-Q超纯水，其余试剂均为分析纯。　　肿节风药材采于广西东兰县肿节风药材GAP基地，自2007-05～2007-12每月采全株样，根、茎、叶分开，60℃下烘干。　　2方

4、法与结果　　2.1对照品溶液的制备　　2.1.1总黄酮对照品溶液精确称取芦丁对照品20mg，置于50ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.4mg/ml芦丁对照品溶液〔5〕。　　2.1.2反丁烯二酸与异嗪皮啶对照品溶液精确称取反丁烯二酸对照品7.5mg，异嗪皮啶对照品1.8mg，置25ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液(含反丁烯二酸0.3mg/ml，异嗪皮啶0.072mg/ml)。　　2.2供试品溶液的制备准确称取干燥，粉碎，过3号筛的肿节风药材根、

5、茎、叶粉末各0.5g，置250ml烧瓶中，按1∶30的料液比分别加入60%乙醇回流提取1h，过滤后重复提取2次，合并滤液，减压浓缩至干，以蒸馏水溶解残物，定容至25ml，备用。　　2.3总黄酮测定波长的选择取芦丁对照品溶液0.5ml，置10ml容量瓶中，用30%的乙醇补充至5ml，加入5%NaNO2溶液0.3ml，放置5min，加入10%Al(NO3)3溶液0.3ml，6min后加入4%NaOH溶液2.0ml，此时溶液显红色，混匀后以30%乙醇稀释至刻度，静置10min后于紫外分光光度计下进行全波长

6、光谱扫描，在500nm处有最大吸收值，因此以500nm作为总黄酮的检测波长。　　2.4色谱条件色谱柱为AgilentHypersilODSC18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相A为0.05%磷酸水溶液；流动相B为乙腈；检测波长210nm；柱温35℃。梯度条件0～8min流动相B5%；8～30minB5%～12%；30～45minB12%～19%。经测试，样品峰分离度在1.5以上，反丁烯二酸理论塔板数在5000以上，异嗪皮啶理论塔板数在10000以上。　　2.5标准曲线的绘制　　2.5.1

7、总黄酮标准曲线分别取芦丁对照品溶液0，0.25，0.5，0.75，1.25，1.5ml于10ml的容量瓶中，按“2.3”项下方法处理后，于紫外分光光度计下测定吸光值，检测波长500nm。以标样浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程Y=9.4975X+0.0413,r=0.9999，线性范围：0.01～0.06mg/ml。　　2.5.2反丁烯二酸与异嗪皮啶标准曲线精确吸取体积为0.04，0.2，0.4，2，4，6，8ml的反丁烯二酸与异嗪皮啶混合对照品溶液于25ml的容量瓶中，加水稀释

8、至刻度，定容后以0.45μm微孔滤膜过滤，精确吸取20μl，注入高效液相色谱仪测定。以进样质量为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线，分别得反丁烯二酸和异嗪皮啶的回归方程为：Y=6966848.6362X+702737.2867，r=0.9996；Y=14391526.5254X+221002.0133，r=0.9998；线性范围：反丁烯二酸0.024～4.8μg；异嗪皮啶0.006～1.152μg。　　2.6方法学考察　　2.6.1总黄酮方法学考察　　精密度实验：取