碱性成纤维细胞因子在博莱霉素致肺纤维化肺血管损伤中的作用

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1、碱性成纤维细胞因子在博莱霉素致肺纤维化肺血管损伤中的作用刘华，陈利萍，朱新菊，贺永锋，赵杰，刘新社【摘要】目的探讨碱性成纤维细胞因子(bFGF)在博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化肺组织中的表达及其在肺血管损伤中的作用。方法于大鼠气管内注射BLM以复制其肺纤维化模型,应用bFGF多克隆抗体按SABC法行免疫组织化学染色,定量图像分析。结果BLM组动物支气管上皮细胞胞浆内、支气管和肺小动脉肌层以及肺泡巨噬细胞胞浆内可见较多棕黄色细颗粒状bFGF阳性表达产物,显著高于对照组(P0.05)。结论在BLM致大

2、鼠肺纤维化过程中bFGF表达上调，提示bFGF可能参与肺间质纤维化的发病过程。【关键词】碱性成纤维细胞因子；博莱霉素；肺纤维化；血管损害；免疫组化　　TheroleofbFGFinvascularinjuryof　BLMinducedpulmonaryfibrosis　　ABSTRACT:ObjectiveToexploretheexpressionofbasicfibroblastgroonarytissuesofratsycininducedpulmonaryfibrosisandthero

3、leofbFGFinvascularinjury.MethodsPulmonaryfibrosisycin(BLM).LungexpressionofbFGFproteinsmunohistochemistryusingbFGFmonoclonalantibodyandquantitativeimageanalysis.ResultsTheexpressionofbFGFinthelungtissuesofBLMgroupainlydistributedinbronchioleepithelialc

4、ells,muscularlayersofbronchiandarterioles,andalveolarmacrophage.Itonaryfibrosisindicatesthatitdirectlyparticipatesintheprocessofpulmonaryfibrosis.　　KEY)致大鼠肺组织纤维化中肺组织bFGF的表达，从血管损伤方面探讨bFGF在BLM致肺间质纤维化的发病机制中的作用。　　1材料与方法　　1.1实验动物及分组体重200-250g的健康雌性组和生理盐水对照组，

5、每组30只。　　1.2肺纤维化模型的建立BLM组用戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，在无菌操作下作颈部正中切口，逐层暴露气管，用lmL注射器(前带7号针头)抽取含BLM(5mg/kg)的生理盐水0.2-0.3mL，经两气管软骨环间隙朝向心端刺入气管。将大鼠直立，继续朝向心端进针约1.0-1.5cm，回抽出空气并无阻力后，将药液注入气管，旋转动物，使药液在肺内分布充分、均匀。缝合伤口。对照组，在同样条件下，向气管内注入相同体积的生理盐水。两组动物分别于气管内灌注后3、7、14、21、28d

6、随机处死动物各6只。　　1.3肺组织病理标本的制作戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠。常规消毒后开胸，暴露心肺，于右心室插入与输液器相连的针头，左心耳剪一约2mm左右切口，向右心室内灌注PBS(pH7.4)冲洗血管至双肺呈白色胶冻状。结扎左主支气管，经气管向右肺注入40g/L多聚甲醛6mL，使胸膜展开，结扎气管后右肺置40g/L多聚甲醛中固定。上、中、下叶各取材一块，常规脱水，石蜡包埋，切片(5μm)。　　1.4bFGF免疫组织化学染色采用免疫组化SABC法，bFGF多克隆抗体购自博士德公

7、司。免疫组织化学染色按试剂盒说明书进行：①石蜡切片常规脱蜡、脱水；②3%(体积分数)H2O2(蒸馏水新鲜配制)室温5min以灭活内源性酶，蒸馏水洗，3min×3；③复合消化液1min，蒸馏水洗，3min×3；④正常工作血清封闭液室温10min，甩去多余液体，不洗；⑤兔抗大鼠bFGF多克隆抗体(IgG型)，经预试验选择工作浓度为1∶100，4℃过夜，0.01mol/LPBS洗，3min×3；⑥生物素化山羊抗兔IgG抗体，37℃20min，0.01mol/LPBS洗，3min×3。⑦SABC试剂37℃2

8、0min，0.01mol/LPBS洗，5min×4；⑧DBA室温显色，蒸馏水洗；⑨苏木素复染，脱水、透明、封片。各组均设阴性对照切片，以0.01mol/LPBS代替一抗。　　1.5bFGF的定量分析使用北京航空彩色病理图像分析系统。将待测切片放置在连接计算机的显微镜下观察。每组6只动物，每只动物取3张组织切片,每张切片取5个视野(上、中、下、左、右)，于高倍镜下(×400)检测bFGF平均吸光度值(A)。　　1.6统计学处理采用SPSS12.0统计分析软件，各组间进行