增骨丸对维甲酸诱导的大鼠骨质疏松模型影响的实验研究论文

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1、增骨丸对维甲酸诱导的大鼠骨质疏松模型影响的实验研究论文.freelL含生药2.67g，冷藏备用。乙烯雌酚：购自甘肃省中医学院附属医院，由天津力生制药股份有限公司生产，批号2020154，每片1mg，使用时研磨以蒸馏水配制成0.01mg/ml的药液灌胃。维甲酸：购自重庆华邦制药股份有限公司，批号0950191，每个胶囊20mg，使用时研磨以蒸馏水配制成10mg/ml的混悬液灌胃，现配现用。BGP放免试剂盒、E2放免试剂盒（北京北方生物技术研究所生产），TRAP试剂盒、AKP试剂盒、Ca试剂盒、P试剂盒、HOP试剂盒、Cr

2、试剂盒（南京建成生物工程研究所生产）。1.3主要仪器LG-3A高速冷冻离心机（北京医用离心机厂）、VIS-7220型可见分光光度仪（北京第二光学仪器厂）、SN-695B型智慧放免测量仪（上海原子能研究所日环仪器厂）、CX全自动生化分析仪(美国Beckman公司生产)。1.4实验方法1.4.1动物的分组和造模实验前适应性喂养10d，将50只大鼠按体重随机分为2组：一组为正常组13只，以蒸馏水灌胃，1次／d，3mL／次。另一组为骨质疏松组37只，每只每天给予维甲酸按70㎎／㎏灌胃14d，1次／d。在第15d两组各处死5只大

3、鼠取材（胫骨），观察模型复制情况。1.4.2给药与饲养所有动物在统一条件下（室温19～24℃，相对湿度40%左右），普通饲料喂养（由兰州大学医学院动物饲养中心提供），自由饮水。造模成功后进入45d的治疗阶段，给药剂量按人与大鼠体表面积比折算成等效剂量。因两组各处死5只大鼠，加之在造模及喂养过程中因不明原因骨质疏松组又死亡2只，故正常组为8只，骨质疏松组为30只。再将骨质疏松组随机分为3组：模型组10只，灌蒸馏水3mL/次；增骨丸组10只，按5g/（㎏·d）剂量灌胃45d；乙烯雌酚组10只，按0.86mg/（㎏·d）剂量

4、灌胃。各组大鼠每周灌胃6次，连续灌胃45d。1.4.3取材与处理灌药第46d处死大鼠，处死前用电子台秤称其重量。股动脉取血3～5mL，置37℃水浴箱中2h，待血清分离后离心（2000r/min），取大鼠血清置-20℃低温冰箱保存待测。处死前1d，分别置大鼠于代谢笼中，收集24h空腹尿液，置-20℃低温冰箱中备用。1.4.4检测指标和方法放免法测血清BGP及E2含量。采用偶氮胂Ⅲ法测定血清钙及尿钙(S

5、Ca、U

6、Ca，mol/L)，磷钼酸法测定血清磷(S

7、P,mol/L)，比色法测定血清碱性磷酸酶(S

8、AKP,IU/L)

9、，用比色法测定血清抗酒石酸酸性磷酸酶(S

10、TRAP,IU/L)，用苦味酸法测定尿肌酐（U

11、Cr,umol/L)，用氯安T法测定尿羟脯氨酸(U

12、HOP,mg/L)，并计算U

13、Ca/U

14、Cr值、U

15、P/U

16、Cr值、U

17、HOP/U

18、Cr值。1.4.5统计方法所有数据均输入计算机，采用SPSS10.0统计软件进行处理。计量数据所有数据用均数±标准差（±ｓ）表示，采用LSD法进行显著性检验。2结果2.1模型复制情况2.1.1一般表现造模期间骨质疏松组动物出现进食减少，体毛枯疏，反应迟钝，口唇炎，结膜充血，体重减轻等不良反应的表征

19、。2.1.2模型期各组大鼠血清E2、AKP、BGP、TRAP含量结果比较见表1。表1模型期各组大鼠血清E2、AKP、BGP、TRAP含量结果比较（略）注：与正常组比较*P0.05，**P0.01表1显示，骨质疏松组大鼠血清E2水平明显降低(P0.01)，TRAP活性明显升高(P0.01)，表明维甲酸诱导大鼠骨质疏松致性腺损伤、萎缩，使血清E2明显降低，雌激素水平下降，对破骨细胞的抑制作用降低，使骨吸收增强。骨质疏松组血清AKP明显高于正常组(P0.05)，表明成骨细胞活性增强，反映了骨改建的活跃状态。血清AKP的升高可

20、能是骨吸收亢进伴随着成骨细胞功能活跃的结果。骨质疏松组血清BGP显著高于正常组(P0.05)，说明骨丢失处于快速时相期，由于骨吸收和骨形成的偶联作用，具有修复和代偿作用的骨形成增多。2.1.3模型期各组大鼠U

21、Ca、U

22、HOP含量及U

23、Ca/

24、UCr、U

25、HOP/U

26、Cr值的结果比较见表2。表2模型期各组大鼠U

27、Ca、U

28、HOP含量及U

29、Ca/U

30、Cr、U

31、HOP/U

32、Cr值的结果比较（略）注：与正常组比较*P0.05，**P0.01由表2可以看出，骨质疏松组大鼠U–Ca含量、U

33、Ca/U

34、Cr值高于正常组（P0.05

35、或P0.01），说明维甲酸诱导大鼠骨吸收增加，骨钙丢失严重，尿钙排除增多；骨质疏松组大鼠U

36、HOP含量、U

37、HOP/U

38、Cr值明显高于正常组（P0.01），说明维甲酸诱导大鼠骨吸收增加，骨基质丢失严重。2.2给药后各组情况2.2.1各组大鼠血清E2、TRAP、BGP含量结果比较见表3。表3各组大鼠血清E2、TRAP、BGP含量结果