电针对大鼠胃粘膜胃泌素和egfr表达及agnor的影响论文

《电针对大鼠胃粘膜胃泌素和egfr表达及agnor的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、电针对大鼠胃粘膜胃泌素和EGFR表达及AgNOR的影响论文.freelalgroucosa;im-munocytochemistryAbstract:AIMToobservetheeffectofelectroacupuncturestimulationofzusanliontheexpressionofGasandEGFRingastricmucosainordertoprobemechanismsofacupuncture.METHODS75SDratsizedinto5groups:Controlgroup，non-pointgroup，zusanligroup，sa

2、nyinjiaogroupandunitepointgroup.Allratsentedonconsciousness.ImmunohistochemicalstainingbymeansofSABCorSPtechniqueucosa.MeanucosacellsucoustissueofthezusanligroupafterEAshoucoustissueulationofzusanlicanenhancetheexpressionrateofEGFRandGasingastricmucoas，butexertnoeffectsontheproliferationof

3、gastricmucouscells.0引言中医认为，经脉与脏腑相关，针刺经络腧穴可调节脏腑功能［1］.但针刺如何调节脏腑功能，经穴与脏腑功能联系的本质是什么?尚不清楚.前期研究发现针刺胃经腧穴引起胃运动及胃分泌功能变化［2］，同时，胃泌素［3］、胃动素［4］、生长抑素［5］、表皮生长因子［6］等浓度发生变化.电针足三里引起兴奋性肽类激素浓度降低如血浆及胃液Gas减少［7］;引起抑制性肽类激素浓度增加如胃液及胃粘膜EGF增加［6］，同时发现胃酸分泌降低［8］.胃肠肽类激素与相应受体结合后发挥作用.现探讨电针足三里是否引起Gas受体及EGFR变化及胃腺细胞核增殖变化.1材料和

4、方法1.1材料SD种系大鼠（本校实验动物中心提供），体质量（200±50）g，12～14olL-1，pH=7.4），AgNOR工作液均由本实验室配制.1.2方法大鼠在无麻醉、无创伤、完全清醒状态下接受电针刺激.穴位选取参照“中国兽医针灸学”，“大鼠的解剖和组织”而定.G6805-A型电针治疗仪（广东汕头医疗仪器厂生产）参数选择，频率范围2～15Hz，空载电压20～35V，调制脉冲为疏密波，电针时间30min，以双下肢轻微颤抖为宜.空白对照组不行针刺，其他条件与针刺相同.同一时辰电针双侧穴位.所有大鼠于电针结束前禁食24h，自由饮水，结束后即刻im846合剂10mLkg-1，

5、麻醉后即刻剖腹取胃组织1.0cm×0.3cm×0.5cm，立刻置于40gL-1多聚甲醛固定2h，然后经洗涤、脱水、透明、浸蜡和包埋后形成石蜡块.①免疫组化染色采用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶技术（SP法）.具体步骤如下:石蜡组织块切片（厚4μm），贴于涂有多聚赖氨酸的载玻片上;60℃烘烤1h后，37℃恒温箱内烘烤2d;逐级二甲苯脱蜡;递度乙醇至水;PBS洗3次，过氧化酶阻断10min;PBS洗3次，胃蛋白酶消化（37℃，20min）;PBS洗3次，非免疫性动物血清孵育（37℃，5min）;PBS洗3次，加第一抗体（抗EGFR1:50，抗Gas1:100）孵育（37℃，60m

6、in）;PBS洗3次，加生物素标记的第二抗体孵育（37℃，10min）;PBS洗3次，加链霉亲和素-过氧化物酶孵育（37℃，10min）;PBS洗3次，加DAB显色（3～10min），自来水冲洗，苏木素浅染，还蓝，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封闭，显微镜下观察、摄影.以正常大鼠血清替代一抗作为替代对照.以PBS代替―抗作空白对照;已知阳性标本作阳性对照（生物技术公司提供）.结果判断以组织细胞中棕黄色细颗粒状染色存在为阳性.每一切片随机取5个视野，各计数20个细胞，计算阳性细胞所占比例，以-，+，，分级和统计.②Ag-NOR特染取甲液（明胶粉2g，溶于双蒸水中至99mL

7、，60℃使之完全溶解，然后加入纯甲酸1mL，摇匀待用.）10mL，乙液（硝酸银50g，溶于双蒸水至100mL，充分溶解后保存于冰箱）20mL，混合于染色缸中配成AgNOR工作液.具体染色步骤:石蜡切片4μm，脱蜡至水，双蒸馏水浸洗2次，在AgNOR工作液中（25℃），染25～30min，双蒸水浸洗3次，无水乙醇浸洗2次.二甲苯石炭酸（41）1min;二甲苯透明，中性树胶封固;显微镜下观察，计数银颗粒数.结果判断以高倍光镜下观察10个视野共100个壁细胞，计数每个壁细胞核内银颗粒平均数.统计学处理:结果以阳性表达率及