甲醛吸入对小鼠免疫系统毒性作用论文

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1、甲醛吸入对小鼠免疫系统毒性作用论文梁瑞峰,原福胜,白剑英,赵五红【摘要】目的通过吸入甲醛(formaldehyde,FA)染毒小鼠观察其免疫损伤作用。方法选用健康清洁级昆明种小鼠30只,随机分成5组(即阴性对照组1,3,5?mg/m3染毒组和阳性对照组).freelaldehyde,FA)是造成室内空气污染的主要物质〔2〕,其对人体的健康危害不容忽视。目前,对甲醛造成的免疫损伤国内外研究较少。因此,本文从免疫病理、细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫等4个方面对甲醛的免疫毒性作用进行了研究,为建立甲醛免疫毒性的卫生标准提供理论依据。1材料与

2、方法11主要试剂甲醛,分析纯(上海溶剂厂);注射用环磷酰胺(CP)(上海华联制药有限公司);淋巴细胞分离液,Q/GHSB85-2001(上海恒信化学试剂有限公司);3-氨丙基三乙氧硅烷(APES),32K1265(武汉博士德生物工程有限公司);兔抗鼠CD3、CD4、CD8单克隆抗体,即用型RSC7219K(天津灏洋生物工程有限责任公司);浓缩型二氨基联苯胺显色(DAB)试剂盒(天津灏洋生物工程有限责任公司);刀豆蛋白A(ConA)、四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)试剂盒(北京夏斯生物技术有限公司)。12仪器及设备50?L静式染毒柜;GS-

3、3交直流两用大气采样仪;VIS-7220分光光度计:PRECISA300MC电子天平;SHZ-22水浴恒温振荡器;光学显微镜,BH-2(日本OLYMPUS公司);QL-901旋涡混合器等。13实验方法采用健康昆明种纯系小鼠30只,鼠龄7周,体重18~22?g(山西医科大学动物中心)。将动物随机分为5组(即阴性对照组,1,3,5?mg/m3染毒组和阳性对照组),每组6只,雌雄各半。采用甲醛静式吸入染毒,每天染毒2?h,连续染毒14?d。阴性对照组吸入过滤的新鲜空气,处理时间与染毒组相同。阳性对照组从第8?d开始,每日按40?mg/(kg

4、·bg)/体重(g);(2)脾脏和胸腺CD3含量、CD4含量、CD8含量测定:将取出的小鼠脾脏、胸腺按文献〔3〕方法制备成浓度为1×106的细胞悬液,再取其50?μl滴于经APES处理过的载玻片上,制成淋巴细胞涂片,之后分别按试剂盒说明书对脾脏、胸腺CD3、CD4、CD8含量进行测定,计算阳性细胞率;(3)脾脏淋巴细胞功能转化测定:采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法〔4〕;(4)迟发型超敏反应测定:采用足垫增厚法〔5〕;(5)抗体生成细胞数测定:采用溶血空斑试验(PFC试验)〔6〕;(6)巨噬细胞吞噬功功能测定:采用鸡红细胞吞噬实验〔7〕

5、。15统计分析采用SPSS?100统计软件进行方差齐性检验、方差分析、相关分析。2结果21小鼠脾脏、胸腺系数测定(表1)表1甲醛对小鼠脾脏、胸腺系数的影响(略)注:与阴性对照组比较,*P005,**P001从表1可知,各甲醛染毒剂量组小鼠脾脏、胸腺系数随染毒剂量升高呈明显下降趋势,除1?mg/m3染毒组脾脏系数与对照组比较差异无统计学意义外,其他各染毒剂量组与对照组比较,差异均有统计学意义(P005或P001)。22甲醛对小鼠脾脏、胸腺CD3、CD4、CD8含量的影响(表2、表3)表2甲醛对小鼠脾脏CD3、CD4、CD8

6、的影响(略)注:与阴性对照组比较,*P005,**P001表3甲醛对小鼠胸腺CD3、CD4、CD8的影响(略)注:与阴性对照组比较,*P005,**P001从表2可知,各甲醛染毒剂量组小鼠脾脏CD3、CD4、CD8阳性细胞数随甲醛染毒剂量的升高呈明显下降趋势,除1mg/m3染毒组CD3含量、CD4含量及3mg/m3染毒组CD4含量外,其他各测量值与对照组比较差异有统计学意义(P001),并且两者间呈剂量反应关系(r=0771,P001;r=0660,P001;r=0914,P001);且CD4/CD8明显增大,与对

7、照组比较差异有统计学意义(P005)。从表3可知,各染毒剂量组小鼠胸腺CD3、CD4、CD8阳性细胞数明显低于对照组,除1?mg/m3染毒组外,其他组与对照组比较差异有统计学意义(P005或P0,01),小鼠胸腺CD3、CD4、CD8阳性细胞数与甲醛染毒剂量间有明显剂量-反应关系(r=0881,P23脾淋巴细胞功能转化实验1,3,5?mg/m3甲醛染毒组小鼠脾淋巴细胞转化功能吸光度(A)值分别是(0267±0124),(0235±0058),(0227±0158),与对照组小鼠脾淋巴细胞转化功能吸光度(A)值(0.4

8、67±0089)比较,差异有统计学意义(P005或P0.01)。24迟发型超敏反应测定随甲醛染毒剂量的升高,各染毒剂量组小鼠迟发超敏反应强度呈明显下降趋势,3个染毒组小鼠足垫厚度差分别为(0059±

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