三氧化二砷对阿霉素耐药的白血病细胞血管新生相关因子的影响论文

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1、三氧化二砷对阿霉素耐药的白血病细胞血管新生相关因子的影响论文陈牧张建东张育王晓铃沈维干李国青【摘要】目的探讨三氧化二砷(arsenictrioxide,As2O3)对白血病耐药细胞株K562/A02细胞血管新生相关因子血管内皮生长因子（VEGF）表达水平及基质金属蛋白酶2、9（MMP2、9）活性的影响。方法用噻唑蓝法(MTT)测定As2O3对K562/A02细胞的增殖抑制作用，用酶联免疫吸附试验测定细胞上清中VEGF含量，用明胶酶谱法半定量测定细胞上清中MMP2、9的活性。结果K562/A02细胞的IC50是（1.64±0.16）μM，0.05μMAs2O3对细胞增殖和VEGF的表达没有明

2、显影响，对MMP2、9的活性在24、48h无明显影响(P0.05)，但在72h则对MMP2、9的活性有明显抑制作用(P0.05)；0.4和3.2μMAs2O3可显著抑制细胞增殖，下调VEGF并使MMP2、9活性减弱(P0.05)。结论As2O3可能通过下调VEGF的表达和抑制MMP2、9活性而发挥抗白血病细胞血管新生作用。【关键词】三氧化二砷；血管内皮生长因子；基质金属蛋白酶；明胶酶谱EffectofArsenicTrioxideonRelatedFactorsofAngiogenesisinK562/A02CellsAbstract：ObjectiveToinvestigatethe

3、effectofarsenictrioxide(As2O3)ontheexpressionofVEGFandtheactivityofMMP2and9inK562/A02cells.MethodsMTTassayelinkedimmunosorbentassay(ELISA)ographyassayechanismofantileukemicangiogenesisbyAs2O3maybeachievedbyinhibitingtheexpressionofVEGFandtheactivityofMMP2and9.Keyographyassay0引言肿瘤细胞的多药耐药(Multidru

4、gresistance,MDR)是导致临床白血病患者化疗失败的常见原因。造成肿瘤细胞MDR的因素众多，其中血管新生(Angiogenesis)与肿瘤多药耐药的关系正逐渐受到越来越多的重视。肿瘤血管新生不仅是白血病发生、发展和浸润的重要条件.freeletalloproteinase，MMP)所具有的复杂的生物学效应也直接或间接增强了肿瘤细胞的MDR1,2。因此，如果能有效下调多药耐药细胞表达的血管新生相关因子，无论从肿瘤的血管新生还是多药耐药均具有积极意义。本文即以白血病多药耐药细胞株K562/A02细胞为研究对象，通过对不同浓度三氧化二砷（Arsenictrioxide，As2O3）处理K5

5、62/A02细胞24、48和72h后VEGF表达水平及MMP2、9活性变化情况的研究，进一步阐明了As2O3对多药耐药细胞株K562/A02的VEGF和MMP2、9的调控作用。1材料和方法1.1药物配制As2O3用1mM的NaOH溶液溶解并配成12.8mM贮备液，4℃贮存。实验前用培养基稀释成0、0.05、0.4和3.2μM4个浓度。1.2细胞培养K562/A02白血病耐药细胞株购自中国医学科学院天津血液学研究所，接种于RPMI1640培养基(含10%小牛血清，100Ｕ/ｍl青霉素,100μg/ｍl链霉素)，用浓度为2μg/ml的阿霉素以维持细胞耐药性，于37℃、5%CO2、饱和湿度环境

6、下常规培养。实验时提前两周停用阿霉素。1.3MTT法测定As2O3对K562/A02增殖抑制作用取对数生长期细胞，以1×105/ml的浓度接种于96孔板，培养24h后离心去上清，加入不同浓度As2O3含药培养基，孵育72h后用MTT法检测570nm处吸光度，并计算细胞增殖抑制率。抑制率=(1-加药组OD值/对照组OD值)×100%。1.4ELISA测定细胞上清中VEGF含量细胞接种于24孔板，培养方法同上，经不同浓度As2O3含药培养基孵育24、48和72h后收获细胞及上清。VEGF检测过程按试剂盒(博士德生物工程有限公司)说明书操作，在450nm处测定OD值并绘制标准曲线。每组设3个复孔，实

7、验重复3次。1.5MMP2、9活性用明胶酶谱法检测实验方法：取对数生长期细胞，用培养基调整为2×105/ml，接种于24孔板，培养24h后离心去上清，加入不同浓度As2O3孵育24、48、72h后收获上清。用Loin，上样于含0.8%明胶的8%聚丙烯酰胺凝胶中进行垂直电泳，初始电压80V，待溴酚蓝至分离胶后加至150V。电泳结束后，将凝胶依次置于洗脱液中(25g/LTritonX100，50m