过量胸苷对细胞周期素表达的影响论文

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1、过量胸苷对细胞周期素表达的影响论文沈青，杨存明，张国成，姚裕家，付雪梅【关键词】细胞周期蛋白类【Abstract】AIM：ToexploretheeffectsofexcessivethymidineontheexpressionofcyclinA,B,D1ineachphasesofcellcyclebystudyingtherelationshipbetechanismofcellcycletransition.METHODS：Neonatalpigsrenaltubularepithelialcellsidineblocktechniqueandthedistributi

2、onofG1,S,G2phasesinedbyfloetry.TheexpressionofcyclinA,B,D1munocytochemistry.RESULTS：Floetryanalysisrevealedthat(99.5±0.8)%oftheneonatalrenaltubularepithelialcellsethodoftheexcessivethymidineblocktechnique.TheexpressionofcyclinAatG2phasesidinemaybeassociatedidine；cyclins;kidneyTubules;epithel

3、ialcells【摘要】目的:探讨过量胸苷干扰细胞周期素细胞周期时相表达的特点，为进一步研究细胞周期转化以及细胞周期素与DNA合成的关系奠定基础.方法:应用二次过量胸苷阻断法进行新生猪肾小管上皮细胞体外同步化培养，采用流式细胞术进行鉴定；然后分别进行G1/S.freelAb免疫细胞化学染色并进行图像分析.结果:二次过量胸苷阻断法可获取G1/S界面细胞为(995±08)%，S期细胞为(905±07)%，G2期细胞为(935±22)%，G2/G1=220.G1/S，S，G2细胞CyclinA表达特点为G2期大于G1/S和S期（目标灰度值：1363±27，1450±14，1475±1

4、8，P001）,.freela产品，终浓度为2mmolL-1）；低糖DMEM，1250胰蛋白酶（Gibco产品）；cyclinD＼A＼BmAb，生物素化二抗，SABC，DAB显色试剂盒(博士德生物工程公司产品)；胎牛血清（天津生物制品研究所）；CYCLETESTTMPLUSDNA试剂盒（BD公司产品）.1.1.2主要仪器设备万级层流工作室、BCM100型生物洁净工作台、ias2000图像分析系统（四川大学图像研究所研制）.12方法1.2.1肾小管上皮细胞同步化培养［３］正常培养细胞3~4d，达到大约50%-70%的覆盖率；加入胸苷（thymidine），使其终浓度为2mmolL

5、-1，继续培养16~18h，使细胞停留在G1/S期边界；吸去培养液，洗1～2次，用新鲜的培养液培养12h；加入终浓度为2mmolL-1的胸苷，继续培养20h；吸去培养液，洗1～2次，收集G1/S期细胞；在诱导的G1/S期细胞中，加入新的培养液，继续培养3h，收集S期细胞；在诱导的G1/S期细胞中，加入新的培养液，继续培养8h，收集G2期细胞.并配制1×106mL-1细胞悬液备用.1.2.2流式细胞术DNA检测［４］DNA含量用ModFit2.0和DI2.8软件分析.1.2.3常规免疫细胞化学［５］结果在Mias2000图像分析系统分析.统计学处理：平均目标灰度值以x±s表示，应

6、用国际通用SPSS（Vol.10.0）进行单因素的方差分析.两两均数的比较应用Dunt进行分析.2结果2.1新生猪肾小管上皮细胞各细胞周期时相获取比例将获取的G1/S，S，G2细胞进行FACS检测，激发光为氩离子激光488nm谱线，建立FL2A直方图，ModFit2.0软件进行数据分析，结果如Fig1所示.3组细胞DNA覆盖比较应用DI2.8软件分析，结果如Fig2.G1（99.5±0.8）%，S（905±07）%,G2（935±22）%.图1G1期细胞DNA（略）Fig1TheresultinggatedDNAhistogram（略）图2G1，S，G2细胞DNA（略）Fig2

7、TheresultinggatedDNAhistogramdisplayingstainingofG1phasedisplayingstainingofG1,S,G2phases（略）2.2CyclinA＼B＼D1在各细胞周期时相表达的特点G2期新生猪肾小管上皮细胞cyclinA目标平均灰度明显低于G1后期(P0.01)，而G1后期与S期细胞的目标平均灰度差异无统计学意义（P0.05）.提示cyclinA在G2期新生猪肾小管上皮细胞中的表达明显高于G1后期和S期（Tab1）.cyclinB随