流动注射化学发光测定金钱草抗氧化活性论文

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1、流动注射化学发光测定金钱草抗氧化活性论文刘彩红，张莹，李玉琴，齐永秀【摘要】目的用流动注射化学发光法研究中药金钱草的抗氧化性能。方法将中药金钱草提取物加入三种化学发光体系，测量其发光强度，根据系统化学发光被抑制的程度评价金钱草对活性氧的清除能力，并以抗坏血酸为阳性对照。结果金钱草提取液对O2-·、·OH、H2O2三种自由基有较好的清除作用，且清除作用随浓度的增加而增加；对三种自由基的清除能力：H2O2·OHO2-·。结论中药金钱草可作为潜在的具有抗氧化活性的天然药物。【关键词】流动注射化学发光；金钱草提取液；抗氧化活性金钱草为报春花科(Primulacea

2、e)珍珠菜属(Lysimachia)植物过路黄LysimachiachristinaeHance的新鲜或干燥全草.freelinol)-碳酸盐缓冲液，亚铁氰化钾-鲁米诺-H2O2，H2O2-鲁米诺-碳酸盐缓冲液3个产生自由基的体系，对金钱草提取液与维生素C溶液对比研究其清除O2-·，·OH，H2O2自由基的能力，希望为合理开发该药提供参考。1材料与仪器邻苯三酚溶液用1mmol·L-1的HCl溶液配制，使用前用二次蒸馏水稀释至所需浓度，鲁米诺用0.1mol·L-1的NaHCO3-Na2CO3缓冲溶液配制成所需浓度；亚铁氰化钾、鲁米诺以及H2O2均用KH2PO

3、4-NaOH(pH=7.20)缓冲溶液配制，使用前配制；所用试剂均为分析纯；实验用水均为二次蒸馏水。IFFM-D型流动注射化学发光分析仪西安瑞迈科技有限公司。2方法2.1样品溶液的制备样品溶液的制备参照文献［5］方法进行。取5g金钱草粗粉，加8倍量75%乙醇，超声提取3次，每次45min，合并提取液，滤过，用石油醚萃取，分离，浓缩，用蒸馏水洗入100ml量瓶，定容，得金钱草样品含量为1.25mg·ml-1。2.2流动注射化学发光法仪器条件实验中仪器条件为：延迟时间20s，测量时间15s，增益1，滤波器截止频率50Hz，采样速度20次·s-1，自动调零(NO

4、)，主、副泵速度和负高压依体系而定。2.3流动注射化学发光按图1设计的流动注射化学发光分析流路，蠕动泵分别泵入邻苯三酚溶液、鲁米诺-碳酸盐缓冲液和H2O（·OH体系中，蠕动泵分别泵入鲁米诺、亚铁氰化钾溶液以及H2O2溶液；H2O2自由基体系中分别泵入H2O2、鲁米诺-碳酸盐缓冲液和H2O），分别在混合器中混合并发生反应,.freelinol反应，使之氧化，产生一个电子激发态的中间物，当其返回基态时，可发出化学冷光，用发光检测装置即可测定发光强度。反应体系中O2-·的量可以用化学发光强度来相对表示。实验中选择邻苯三酚：0.5mmol·L-1；鲁米诺：7mmo

5、l·L-1；NaHCO3-Na2CO3缓冲溶液pH：10.28，此时体系的发光强度、稳定性及重复性较好。2.5·OH清除能力检测·OH由Fe2+催化的Fenton体系产生，鲁米诺为发光增效剂。根据反应物和鲁米诺的浓度对化学发光强度、稳定性以及重复性的影响，本实验选择亚铁氰化钾：4mg·ml-1；鲁米诺：0.35mg·ml-1；H2O2含量：1.8%。2.6H2O2清除能力检测碱性条件下，过氧化氢氧化鲁米诺使之发光，其发光强度与过氧化氢含量成正比，发光强度的下降可以体现样品清除过氧化氢的能力。实验中H2O2含量：0.48%；鲁米诺：0.15mg·ml-1；N

6、aHCO3-Na2CO3缓冲溶液pH：9.9。3结果3.1对O2-·的清除作用根据上述条件，分别对其空白溶液、金钱草提取液及Vc溶液进行化学发光强度测定，每个体系重复测定9次，发光强度取平均值进行计算。结果见图2。由图2可知，金钱草提取液对O2-·自由基有清除作用，且在实验范围内呈明显的量效关系。在低浓度范围内金钱草提取液对O2-·的清除作用低于同浓度的Vc，当二者浓度增大到约为90.06mg·L-1时，对O2-·的清除效果相当，清除率约为62%，二者浓度继续增加，金钱草提取液对O2-·的清除作用则高于同浓度的Vc；金钱草提取液及Vc对O2-·半抑制浓度（

7、IC50）约分别为61.01和42.03mg·L-1。3.2对·OH的清除作用由图3可知，在实验范围内金钱草提取液及Vc对·OH的清除率均随浓度增大而增大。将金钱草提取液与Vc对·OH的清除能力进行对比发现在低浓度范围内，同浓度下前者低于后者，当二者浓度增大到约为17.30mg·L-1时，对·OH的清除效果相当，清除率约为55%，二者浓度继续增加，同浓度下前者则高于后者；金钱草提取液及Vc的半抑制浓度（IC50）约分别为16.05和12.42mg·L-1。3.3对H2O2的清除作用由图4可知，金钱草提取液及Vc对H2O2的清除能力均随浓度增大而增大。相同条

8、件下，金钱草提取液对H2O2的清除能力低于Vc，半抑制浓度（IC5