国产重组人胰岛素注射液的生物利用度研究

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1、国产重组人胰岛素注射液的生物利用度研究　　糖尿病是因自身免疫失调、基因或代谢异常而引起胰岛素缺乏和/或糖异生增加、血糖升高的一类内分泌疾病。国际糖尿病基金会的研究表明全球1型和2型糖尿病的患病率为8.3%。1型和多数2型糖尿病患者由于胰岛β细胞损伤或功能失调均需给予胰岛素治疗。重组人胰岛素是以重组DNA技术合成的一种多肽类激素，其分子结构中包含51个氨基酸残基，与人胰岛β细胞生成的天然人胰岛素结构相同。为实现特定的药动学和药效学特征，满足不同患者的治疗和应用需求，各种重组胰岛素制剂和重组胰岛素类似物不断涌现。重组人胰岛素注射液InsulinR和HumulinR均通

2、过Escherichacoli菌株生产而得，制剂中未加入其他改变药物吸收速率和作用时间的物质。通过以美国Lilly公司的HumulinR为对照品，评价国产重组人胰岛素注射液InsulinR供试品在正常Beagle犬体内的相对生物利用度，并对两者进行生物等效性评价。　　1材料和方法　　1.1实验材料　　1.1.1受试药物重组人胰岛素注射液（InsulinR），规格3mL∶300U，批号20111202，合肥天麦生物科技发展有限公司提供。重组人胰岛素注射液（优泌林R，HumulinR），规格3mL∶300U（笔芯），1支/盒，批号A850900C，分包装批号L02227，法国礼来公司生产

3、。　　1.1.2试剂抑肽酶，比活＞5500U/mg，规格5mg/瓶，美国罗氏公司产品（进口分装），批号6247884，2～8℃保存。　　1.1.3放射免疫分析试剂盒人胰岛素放射免疫分析试剂盒（HumanInsulinSpecificRIAKit）为美国Millipore公司产品，编号HI-14K，该试剂盒主要用于定量测定血清、血浆中人胰岛素的含量。犬C肽放射免疫分析试剂盒（CanineC-PeptideRIAKit）为美国Millipore公司产品，编号CCP-24HK，该试剂盒主要用于定量测定血清、血浆中犬C肽的含量。　　1.1.4仪器ThermoScientificSorvall

4、ST16R低温离心机，为美国Thermo公司产品。GAMMAC12γ计数仪，为美国德普公司产品（附数据处理软件）。　　Accu-ChekPerforma卓越型血糖仪及配套血糖试纸，均为罗氏公司产品。　　1.1.5实验动物健康成年Beagle犬，12只，雌雄各半，体质量8～10kg，7～8月龄，由安徽省阜阳市维光实验动物中心提供，实验动物生产许可证号SCXK（皖）2011-001，实验动物质量合格证0000399。实验动物单笼饲养于全封闭观察室，适应期1个月。观察室温度：16～26℃，湿度：40%～70%，光照：昼夜明暗交替时间为12h/12h，通风：换气次数不低于8次/h

5、，实验动物使用许可证SYXK（津）2011-0005。　　1.2方法　　　　1.2.1剂量设计HumulinR的临床剂量（代偿期）为0.1～0.5U/(kgd?1)，餐前0.5h给药，3次/d。按体表面积折合Beagle犬等效剂量约为0.17～0.86U/(kgd?1)，考虑采用健康Beagle犬作为实验动物，最终选择0.5U/kg剂量作为InsulinR和HumulinR药动学的给药剂量。　　1.2.2试验分组及给药12只健康成年Beagle犬在适应期结束后，随机分成2组，每组6条，雌雄各半。第1次试验，第1组动物于犬颈背部sc受试药InsulinR，剂量为0.5U/kg，给药体积

6、0.1mL/kg；第2组动物sc同剂量同体积的对照药HumulinR。　　经15～16d清洗期后进行第2次试验，交叉给药，即第1组scHumulinR，第2组scInsulinR，剂量和给药体积同前。动物给药后6h统一饲喂。　　1.2.3样品收集与存放受试动物于颈背部scInsulinR和HumulinR，给药体积为0.1mL/kg。于0h（药前）、0.17、0.33、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、5、6h（药后），从前肢头静脉采血约2mL，一滴全血即刻用于血糖测定，其余肝素钠抗凝，低温（4℃）3000r/min离心20min，制备血浆，分装2管。其中1管加入抑肽酶（500

7、kU/mL血浆）以防C肽发生蛋白水解。所有待测样品于?20℃保存，直至测定。　　1.2.4Beagle犬校正后血药浓度测定由于正常动物体内含内源性胰岛素，将干扰血药浓度测定。通常胰岛素和C肽在体内是等分子分泌，测定血浆中犬C肽水平可用于校正内源性胰岛素的水平。本研究采用定量检测特异性犬C肽试剂盒，与胰岛素同步检测血浆中犬C肽浓度以扣除犬内源胰岛素对外源性胰岛素测定的影响。具体方法为：Iex(t)=It0(t)－[C(t)I(t=0)/C(t=0)]，其中I