河北省未治疗患者体内hiv毒株耐药基因检测研究的论文

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1、河北省未治疗患者体内HIV毒株耐药基因检测研究的论文河北省未治疗患者体内hiv毒株耐药基因检测研究【关键词】hiv;未抗病毒治疗;基因型耐药性【摘要】目的研究河北省未接受抗hiv治疗患者体内hiv毒株耐药突变情况，为开展临床抗病毒药物治疗和制定合理的用药方案提供数据支持。方法rtpcr技术扩增hivpol区基因，双脱氧法测定hiv基因序列，并使用contigexpress软件处理原始核苷酸序列，与stanfordhivdrugresistancedatabase(hivdb.stanford.edu)进行对比分析耐药突变情况。结果10例患者hiv毒株基因亚型分析结果均为b亚型。发现存在大

2、量逆转录酶和蛋白酶抑制剂继发耐药变异。结论河北省未治疗患者体内hiv继发耐药变异的存在提示要及早进行耐药检测，适时调整治疗方案。【关键词】hiv;未抗病毒治疗;基因型耐药性studyofgenotypicantiretroviralresistancetestingofhivstrainsinuntreatedhiv/aidspatientsinhebeiprovincezhaohongru,luxinli,zhaocuiying,etal.hebeicenterfordiseasepreventionandcontrol,shijiazhuang050021,china　　【abstrac

3、t】objectivetostudythedrugresistancemutationsofhiv1strainsinuntreatedhiv/aidspatientsinhebeiprovince,andtoprovidethebaselinedataforclinicalantiviraltreatmentandsuitabletherapeuticschedule.methodsthepartialpolsequencesplifiedbyrtpcr,thenthegenesegmentutationsanysecondarymutationsintheirprandrtgene

4、s,uchattentiontothedetectionofdrugresistancemutationsandtheadjustmentofsuitabletherapeuticscheduleintime.　　【keyanimmunodeficiencyvirus;non-antiviralteatment;genotypicantiretroviralresistance　　抗逆转录病毒药物的广泛应用，特别是高效抗逆转录病毒治疗(haart)能有效抑制hiv感染者体内病毒复制，改善临床症状，延长寿命。.但hiv耐药突变所导致的交叉耐药和多重耐药严重降低了hiv治疗效果[1，2]。随着中

5、国艾滋病患者的迅速增加，将会有越来越多的患者接受haart治疗，耐药变异研究日显重要。由于hiv1基因的高度变异性以及耐药性毒株的传播，未经抗病毒治疗的患者也可能携带耐药性hiv毒株。为此本研究选取河北省10例未经抗病毒治疗的hiv/aids患者进行了蛋白酶和逆转录酶的基因型耐药突变分析。　　1对象与方法　　1.1研究对象10例hiv/aids患者来源于河北省，均未接受抗病毒治疗。经省艾滋病确证中心实验室l。10例患者按中国1996年发布的《hiv/aids诊断标准及处理原则》(gb160001995)病例分类及扩大的诊断标准分为艾滋病期(cd4+t淋巴细胞<200/μl)和无症状

6、期(cd+4t淋巴细胞≥200/μl)。　　1.2标本采集与处理用edta3k抗凝采血管采集hiv/aids患者外周静脉血,采血时间为2008年4月，取抗凝血50μl测定cd+4t淋巴细胞数,剩余全血经离心分离血浆后-80℃冻存。　　1.3cd+4t淋巴细胞测定用美国bd公司的流式细胞仪(facscount)测定cd+4t淋巴细胞绝对值。　　1.4hiv载量测定采用rtpcr方法，使用美国roche公司的cobasampllcor自动载量仪及配套试剂盒测定病毒载量。测定的病毒载量数值以病毒载量的lg计算。　　1.5hiv1rna提取采用德国qiagen公司qiaampviralrnam

7、inikit提取hiv1rna，严格按照说明书进行操作。　　1.6hiv蛋白酶基因序列和逆转录酶基因序列的扩增引物设计:参照hiv野生株(hxb2,基因库编号k03455)的序列,设计pcr扩增引物。见表1。(2)目的基因片段的扩增:rtpcr反应(逆转录及第一轮pcr):采用takaraonesteprnapcrkit(amv)，严格按照说明书的要求进行操作，使用1.5ml离心管配制rtpcr反应体系