小连翘内生真菌种群分布及其抗菌性研究

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1、小连翘内生真菌种群分布及其抗菌性研究袁保红，杜青平，邓祖军【摘要】目的分析小连翘(HyperioumssampsoniiHance)内生真菌的分布特征和抗菌活性。方法采用内生菌分离法分离菌株，双培养法对峙试验测定其抗菌性。结果从小连翘的根、茎、叶等不同的器官中分离得到81株内生真菌，经形态学分类鉴定分属于4个目，5个科，26个属，其中头孢霉属（Cephalosporiumsp.）和丝核菌属（Rhizoctoniasp.）为优势菌群。不同部位内生真菌的类型、数量和分布存在差异，根部有31株，分属于12属；茎部有12株，分属于10

2、属；叶部有38株，分属于13属。通过平板对峙实验发现，从小连翘所分离的内生真菌中54.32%对某些植物病原真菌有拮抗活性。结论小连翘内生真菌及其代谢产物中具有潜在活性物质，值得深入研究。【关键词】内生真菌；小连翘；拮抗活性　　StudiesonmunitiesofendophyticfungifromHyperioumssampsoniiHanceandtheirantipathogenicactivitiesinvitro　　Abstract:Theendophyticfungiorphologicallyfromthero

3、ots,stemsandleavesofHyperioumsSampsoniiHance.Eightyonestrainsofendophyticfungiiliesand4orders.Cephalosporiumsp.andRhizoctoniasp.inantgenera.Among81strains,31strainsof12generas,and38strainsof13generainleaves.TheresultsshosSampsoniiHance.Inthedualculturetests,53.48%o

4、falltheisolatedEndophyticfungishoeplantpathogens.Theseendophyticfungiinsidetheplantshaveintimatecorrelationetabolitesmightplayanimportantroleintheplantsagainstthepathogens.　　KeysSampsoniiHance;antipathogenicactivities　　小连翘(HyperioumssampsoniiHance)，别名小翘、七层兰、瑞香草、元宝草等

5、，为多年生双子叶植物药藤黄科植物，味苦、性辛、平〔1〕。全草含鞣质，有光致敏作用，动物食后可产生皮炎；含小连翘碱(hypecorine)和小连翘次碱(hypecorinine)；花含金丝桃素(hepericin)〔2〕，有活血、止痛、调经、止血、消肿之效；小连翘或其提取物作为有效药物成分用于制备治疗睡眠障碍、老年痴呆、记忆力减退等病症的药物〔3〕；同属植物贯叶连翘，在西方国家称圣约翰草，用于治疗忧郁症等疾病已有几百年的历史〔4〕。近年来的研究表明小连翘也具有抗忧郁作用〔5〕。文献报道，小连翘中含有聚（异）戊二烯二苯甲酮类衍生物

6、、萘骈双蒽酮类和黄酮类等多种化学成分，这些成分是小连翘药理作用的主要有效成分，但是要提取和分离这些药物成分还有很多困难〔6〕。近来研究表明,某些药用植物中个别内生真菌能够产生与宿主相同或者相似药理活性的成分〔7〕，由此对药用植物内生真菌的研究引起人们的广泛关注。如果在小连翘内生真菌中能够发现类似的活性物质，无疑找到了一种可替代小连翘植物的新型生物资源。但是至今未见从小连翘中分离及其内生真菌的种群多样性的研究报道。本文对小连翘内生真菌进行了分离和分类鉴定，并对其种群多样性及内生真菌拮抗病原菌的活性的研究报道如下。　　1材料与方法

7、　　1.1材料分离所用材料为小连翘的根、茎、叶，采自中国科学院华南植物园（广州）。采集其健康的组织，无其它病虫害，根、茎与叶分开采集，放于密封袋中，于4℃存放，尽快进行内生真菌的分离。碘伏：威的牌消毒液，主要成份是聚乙烯吡咯烷酮碘（即碘伏），液体剂型，有效碘含量为0.5%，是一种新型的PVP-I消毒剂，深圳市新华鹏消毒剂有限公司生产。NS液：0.9%NaCl；ST液：0.9%NaCl，0.5%吐温80；中和剂：0.9%NaCl，0.5%吐温80，0.5%硫代硫酸钠。　　PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水

8、1000mL，pH7.0。在进行内生真菌的分离时，向培养基中分别加入青霉素、链霉素至50μg/mL。　　1.2供试菌株纹枯病菌(Rhizoctoniasolani)、白叶枯病菌(Xanthomonasoryzaepv.Oryzae)、恶苗病菌(Fusariummonilifo