微生物限度方法学验证方案

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1、微生物限度检测方法学验证方案文件编号：P-P-***********Page11of11批准签字页方案起草岗位/职位姓名签字日期微生物岗/QC人员方案审核岗位/职位姓名签字日期微生物岗/组长生产部/部长质量部/QA监督员方案批准岗位/职位姓名签字日期总工质量受权人P-***********Page11of11目录1.目的42.范围43.责任者及职责44.验证简介45．验证过程76．结果判断87．结论和建议88．异常情况报告89．再验证810．附件8附件1：培养基的灵敏度复核9附件2：稀释液的无菌性检查10附件3：方法验证11P-********

2、***Page11of111.目的按照中国药典2010版（第三部），采用薄膜过滤法进行微生物限度检查，本方案对新修订的方法进行验证。2.范围本公司要求进行微生物限度检查的原辅料和制剂，中间制品以及消毒剂。3.责任者及职责部门职责质量部QC起草并审核验证方案进行验证试验的具体操作完成验证记录中相关操作记录的填写根据验证结果起草和审核验证报告总工负责审核并批准验证方案和验证报告质量部QA审核并批准验证方案和验证报告监督验证方案的实施4.验证简介4.1定义lCFU：菌落数l供试品对照组取规定量供试液，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。l试验组当采取薄

3、膜过滤法时，取规定量供试液，过滤，冲洗，试验菌加在最后一次冲洗液中，过滤后，取出滤膜接入对应培养基中。l菌液组测定所加的试验菌数。l稀释剂对照组用相应的稀释液替代供试品，按试验组规定的方法进行菌落计数。样品组样品溶液菌悬液（50-100CFU）稀释液平均菌落数(CFU/皿)供试液对照组+-+C供试液对照组试验组+++C试验组菌液组-+-C菌液组P-***********Page11of11稀释剂对照组-++C稀释剂对照组1.1菌悬液4.2.1菌种及来源培养基名称名称及代号编号批号有效期至来源营养琼脂培养基金黄色葡萄球菌Staphlococcus

4、aureusATCC6538ATCC大肠埃希氏杆菌EscherichiacoliATCC8739枯草芽胞杆菌BacillussubtilisATCC6633玫瑰红钠琼脂培养基白色念珠菌CandidaalbicansATCC10231黑曲霉AspergillusnigerATCC16404备注检查人：复核人：检查日期：4.2.2菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，30~35℃培养18~24h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，20~25℃培养24~

5、48h。上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50~100CFU的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23~28℃培养5~7天，加入3~5ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50~100CFU的孢子溶液。1.2培养基及稀释液4.3.1培养基和稀释液的名称培养基：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基稀释液：pH7.0的氯化钠蛋白胨缓冲溶液、灭

6、菌纯化水4.3.2培养基灵敏度复核培养基灵敏度复核，参见《培养基的灵敏度检查操作规程》QC2524.3.3稀释液的无菌性检查对稀释液进行无菌检查，14天规定温度培养后应无菌。此操作可与其它试验同时进行。P-***********Page11of111.1供试液的预处理4.4.1样品名称及数量样品编号样品名称取样量/批批号Sn-ASn-BSn-CS01******中间制品1000MLS02*******成品200gS03原辅料1200gS04原辅料2200gS05原辅料…..200gS06消毒剂20mlS07饮用水100mlS08纯水制备过程水1

7、00mlS09…….备注检查人：复核人：检查日期：4.4.2样品预处理方法l*******中间制品无需处理，取原样品50ml作为供试液。l******成品无需处理，取原样品50ml作为供试液。l原辅料1取10g样品，加入灭菌后的PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液至100ml,混匀待用；l原辅料2取10g样品，加入灭菌后的PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液至100ml,混匀待用；l原辅料….取10g样品，加入灭菌后的PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液至100ml,混匀待用；l消毒剂（*******）按照比例进行配制。取1ml样品，加入灭菌后的pH7.0氯化钠蛋白胨

8、缓冲液至100ml,混匀待用。l饮用水取1ml样品，加入灭菌后的纯化水至100ml,混匀待用。P-***********Page11of11l纯水制备