杜仲雄花中三萜类化学成分研究

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1、杜仲雄花中三萜类化学成分研究[摘要]该研究采用正相硅胶柱色谱，反相柱色谱（RP-18），凝胶色谱（SephadexLH-20）以及重结晶等多种分离纯化手段，从杜仲雄花中分离得到9个化合物，通过化合物的理化性质和光谱数据鉴定其结构分别为：3-oxo-12-en-ursane-28-O-α-L-arabinofuranosyl（1→6）-β-D-glucopyranoside（1），2α，3β-dihydroxyurs-12-en-28-oicacid（28→1）-β-D-glucopyranosylester（2），熊果酸（3），α-香树脂醇（4），熊果醇（5），

2、3-O-乙酰基熊果酸乙酸酯（6），3-O-乙酰基齐墩果酸（7），白桦脂酸（8），白桦脂醇（9）。其中化合物1为新化合物，化合物2，4～7为首次从该科植物中分离得到。采用MTT法对所分离的9个化合物进行抗肿瘤活性测试，结果表明仅有化合物3对K562和HepG2细胞显示出一定的抗肿瘤活性，其余化合物对所选的2种细胞均无明显活性。[关键词]杜仲雄花；三萜；抗肿瘤活性杜仲又名思仙，为杜仲科植物杜仲EucommiaulmoidesOliver10的干燥树皮，一属一种，是中国名贵滋补药材，《神农本草经》列为上品[1]。杜仲富含次生代谢产物，主要有木脂素、环烯醚萜、黄酮、酚酸

3、、三萜和甾类等[2]。现代药理研究发现，杜仲具有降血压、抗衰老、抗肿瘤、提高免疫等多种药理作用[3]。杜仲雄花由于具有镇静和提高免疫等作用，近年来已被开发出多种功能性产品，深受广大消费者喜爱[4]。然而对于杜仲雄花进行系统的化学成分分离的研究报道较少，因此，本实验对杜仲雄花95%的乙醇提取物进行系统的分离研究，从中得到9个三萜类化合物，经光谱数据分析并参照相关文献，分别鉴定为3-oxo-12-en-ursane-28-O-α-L-arabinofuranosyl（1→6）-β-D-glucopyranoside（1），2α，3β-dihydroxyurs-12-

4、en-28-oicacid（28→1）-β-D-glucopyranosylester（2），熊果酸（3），α-香树脂醇（4），熊果醇（5），3-O-乙酰基熊果酸乙酸酯（6），3-O-乙酰基齐墩果酸（7），白桦脂酸（8），白桦脂醇（9）。本实验分离的三萜类化合物主要为乌苏烷型五环三萜类化合物，而乌苏烷型三萜化合物很多都具有抗肿瘤活性，如Zhang等[5]发现经过乌苏酸处理后HepG2细胞有凋亡小体的出现，Zhang等[6]发现一种新型的乌苏烷型五环三萜化合物（astilbotriterpenicacid）在体外对K562细胞株具有特异性诱导细胞凋亡的作用。因此本

5、实验选择K562和HepG2102种细胞株观察杜仲雄花分离得到的三萜类化合物的抗肿瘤活性。1材料BrukerAV-400超导核磁共振仪；XevoTQD型质谱仪；WatersQ-Tof高分辨质谱仪；柱色谱硅胶G（青岛海洋化工有限公司，200～300目）；RP-18（YMC公司，50μm）；SephadexH-20（瑞典Pharmacia公司）。K562和HepG2细胞株够买于中国科学院上海细胞库；其余试剂均为国产分析纯。杜仲雄花2013年3月采摘于河南灵宝，由河南大学药学院李钦教授鉴定为杜仲科植物杜仲E.ulmoides的干燥雄花，标本（标本编号：HNCEU-03

6、）现保存于河南省杜仲栽培与利用工程实验室。2提取和分离杜仲雄花（7kg）干燥粉碎后，用95%的乙醇加热回流提取2次，每次2h，减压回收溶剂，得乙醇总浸膏。该浸膏用1.5倍的水分散后，分别用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇等体积萃取3次，回收溶剂，得石油醚部位（100g）、醋酸乙酯部位（150g）、正丁醇部位（250g）。取正丁醇部位100g，经正相硅胶柱色谱，氯仿-甲醇梯度洗脱（9∶1～3∶1）得5个流分Fr1～Fr5。Fr2部分（2.5g）经反相（RP-18）柱色谱，甲醇-水（1∶10～1∶5）梯度洗脱，得到化合物1（12mg），2（810mg）。醋酸乙酯部位经硅胶柱

7、色谱，石油醚-丙酮梯度洗脱（98∶2～90∶10），得4个流分A～D，A部分（4.5g）经正相硅胶柱色谱，石油醚-乙酸乙酯（98∶2～94∶6）梯度洗脱，得到A1～A4部分，A4（89mg）经反相（RP-18）柱色谱，甲醇-水（8.5∶1）洗脱得化合物3（11mg），4（150mg），5（25mg）。B部分（7.9g）经硅胶柱色谱，石油醚-氯仿-丙酮（97∶2∶1～95∶3∶2）得到B1～B3部分，B2部分（102.3mg）经反相（RP-18）柱色谱，甲醇-水（8∶1）洗脱，得到化合物6（15mg），化合物7（10mg）。B3部分（100mg）经反相（RP-18

8、）柱色谱，甲醇-水（9∶