人外周血巨噬细胞培养及功能鉴定_林炜明

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1、86中国免疫学杂志2015年第31卷doi:10．3969/j．issn．1000-484X．2015．01．018①人外周血巨噬细胞培养及功能鉴定②林炜明戴爱玲尹会方杨小燕(龙岩学院生命科学学院，龙岩364000)中图分类号Ｒ292.12文献标志码A文章编号1000-484X(2015)01-0086-04［摘要］目的:从人外周血单个核细胞(PBMC)中分离单核细胞，诱导分化成巨噬细胞并鉴定其功能。方法:应用免+疫磁珠法从人外周血单个核细胞中分选CD14单核细胞，分离后的细胞用流式细胞仪检测其纯度

2、，用含有10%人AB血清和+10ng/ml人M-CSF的IMDM培养基体外培养CD14单核细胞，诱导分化成巨噬细胞，并进行形态特征和吞噬功能鉴定。结+果:免疫磁珠法能从外周血中分离到高纯度的CD14单核细胞，分选前CD14阳性率为10%，分选后CD14阳性率为85.8%。诱导培养7天后巨噬细胞的直径最大可达40～45μm，大部分细胞呈煎蛋状，能有效地吞噬淋巴瘤Ｒaji细胞。结论:从外周血+中分离了高纯度的CD14单核细胞，诱导形成的巨噬细胞具有吞噬淋巴瘤细胞的功能。［关键词］巨噬细胞;磁珠分选;培养

3、;功能鉴定CultureandfunctionalidentificationofmacrophagesfromhumanperipheralbloodLINWei-Ming，DAIAi-Ling，YinHui-Fang，YANGXiao-Yan.CollegeofLifeSciencesofLongyanUniversity，Longyan364000，China［Abstract］Objective:Toisolatemonocytesfromhumanperipheralbloodmononu

4、clearcells(PBMC)，inducemacrophages，andidentifythefunctionofmacrophages.Methods:MonocyteswereisolatedfromPBMCusingmagneticactivatedcellsorting(MACS)anti-+－CD14microbead.SortedCD14andCD14cellswerecheckedbyflowcytometertoevaluatetheefficiencyofsorting.The

5、sorted+CD14cellswereculturedinIMDMmediawith10%humanABserumand10ng/mlM-CSFfor7daystogeneratemacrophages，whichwereidentifiedbymorphologicalfeaturesandphagocytosisfunction.Ｒesults:AhighpurityofmonocyteswasobtainedbyMACS+anti-CD14microbead.ThepercentageofC

6、D14cellswas10%and85.8%beforeandaftersorting，respectively.Themacrophageswereapproximately40-45μminmaximumdiameterandhadthefriedeggcolonymorphologicalfeaturesafter7daysculture.Thelymphoma+(Ｒaji)cellswereefficientlyengulfedbymacrophages.Conclusion:Thehigh

7、purityofCD14monocytesisisolatedfromPBMCandmonocyte-derivedmacrophagesefficientlyengulfedlymphomacells.［Keywords］Macrophages;Magneticactivatedcellsorting;Culture;Functionalidentification单核-巨噬细胞系统包括血液中的单核细胞和分布于单核细胞、巨噬细胞膜表面脂质丰富的区域，组织中固定或游走的巨噬细胞，具有吞噬功能。单而在

8、内皮细胞、上皮细胞等表面则未发现CD14的［3，4］核细胞来源于骨髓干细胞，在骨髓中经前单核细胞存在，目前已被广泛用来鉴定单核巨噬细胞。分化发育为单核细胞，然后由骨髓释放入血，经过血本实验通过采集健康成人新鲜外周血，应用免疫磁+液循环便移行到各个组织中，分化成组织中的巨噬珠法捕获CD14单核细胞，经体外培养分化为巨噬细胞。所有巨噬细胞包括炎症位点和稳态下定居于细胞，建立高纯度的人外周血来源巨噬细胞分离培［1］组织中的均由单核细胞衍生而来。在体外培养养体系，并鉴定其吞噬