高效液相色谱法测定贵州产银杏叶提取物中萜类内酯的含量

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1、高效液相色谱法测定贵州产银杏叶提取物中萜类内酯的含量作者：彭全材，杨占南，胡继伟，钟丽，蒋翠红【摘要】　　目的研究银杏叶提取物中的银杏萜类内酯A，B，C及白果内酯的含量测定方法并对贵州银杏药材银杏萜类内酯的含量进行调查研究。方法本实验采用甲醇超声提取样品，HPLC梯度洗脱。结果银杏萜类内酯日内和日间精密度的RSD均小于1.5%，稳定性实验的RSD为0.65%（n=5），最低检测限为0.50μg/ml，加样回收率为97.7%，97.2%，94.7%，94.6%,RSD（n=5）分别为2.8%,2.3%,2.5%,2.1%。银杏叶提取物样品中GA，GB，GC和BB的总含量均符合《中国药典

2、》（2005版）标准。结论该方法缩减了样品的前处理步骤，节约了实验时间，适用于银杏叶提取物中的银杏萜类内酯A、B、C及白果内酯含量测定；同时也证明贵州作为一个药材大省，银杏的质量也相对较好。【关键词】高效液相色谱-蒸发光散射检测；银杏叶提取物；萜类内酯　　Abstract：ObjectiveTodevelopamethodformeasurementofginkgolideA,B,C,BilobalideintheGinkgobilobaextractfromGuizhouProvince.MethodsTheGinkgobilobaleavesethanolandgradiente

3、lution.ResultsThetheoreticalplatenumberofGinkgolideitofdetectionl,theaveragerecoveryratesethodcanshortenthetimeusedforGinkgobilobaleavespretreatment,andisasimpleandreliablemethodtodeterminethecontentofginkgoliedA,B,CandBilobalideintheGinkgobilobaextract.TheresultsalsoprovethatthequalityofGinkgo

4、bilobainGuizhouProvinceisrelativelygood.　　KeyanceliquidchromatographyDra3D软件模拟了其3D构象（图2），这样就有便于我们直观地了解其最低能量(energyminimum)时的分子构象。　　《中国药典》2005版第Ⅰ部HPLC-ELSD选用正丙醇-甲醇-四氢呋喃为流动相等梯度洗脱测定银杏叶提取物中的内酯，样品前处理要经过水浴溶解-加盐酸-醋酸乙酯萃取-醋酸溶液洗涤-醋酸乙酯洗涤-蒸干-定容等过程，方法复杂、回收率比较难把握、而且重现性较差等。本实验采用HLPC-ELSD梯度洗脱测定银杏叶提取物中的内酯，简化了前处

5、理步骤，具有回收率和重现性高，精密度好等优点，同时也证实贵州产银杏叶提取物中的内酯含量，对贵州产银杏药材的发展进行初步考证研究。　　1器材　　1.1仪器　　岛津高效液相色谱仪：HPLC-20AT；20μl进样阀；Model300ELSD；Hilli2pore公司)；色谱条件：迪马C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)；美国ELMAT660/H超声波清洗器(功率360g置于10ml量瓶中加甲醇到刻度，摇匀即得混合对照品溶液Ⅰ，分别取2.50，0.50，0.25，0.05ml，分别置于10ml量瓶中加甲醇到刻度，摇匀，即得混合对照品溶液Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ，将上述5组对照品置于冰箱中备

6、用。　　2.1.2样品溶液的配制精密称定银杏叶提取物粗粉约0.1g(过40目筛，40℃干燥至恒重)置于25ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，超声处理15min，放冷，摇匀，0.20μm滤膜过滤，取续滤液，上机备用。　　2.2色谱条件　　2.2.1色谱条件流动相：A相为水，B相为甲醇，梯度洗脱。B相随时间变化：30%（0～12min），30%～45%（12～25min线性），45%～30%（25～40min），40min（stop）；流速1.0ml/min；柱温40℃，进样20μl。　　2.2.2蒸发光散射检测器条件漂移管温度：80℃，载气(空气)压力40psi，放大系数(gain)为9。

7、根据对照品的保留时间定性、峰面积比计算GA，GB，GC，BB的含量。　　2.3色谱柱的选择分别用SymmetryC18色谱柱(3.9mm×150mm，5μm)、shim-packC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)、迪马C18色谱柱(4.6mm×300mm，5μm)进行对照品和样品的测定，结果表明，上述3种柱子峰型都很好，但从分离效果和效率综合考虑，我们选择了shim-packC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)。对照品与样品的分析图谱