散发性帕金森病parkin基因突变的论文

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1、散发性帕金森病Parkin基因突变的论文作者：刘珂，滕继军，王修海作者单位：青岛大学医学院生物学教研室，山东青岛266021；青岛大学医学院附属医院神经内科）【摘要】目的探讨散发性帕金森病病人parkin基因的突变情况。方法应用聚合酶链反应单链构象多态性技术(pcrsscp),对18例帕金森病病人和20例正常人parkin基因的第3、4、5、6、7外显子突变情况进行检测分析。结果4例病人有parkin基因第3外显子点突变，1例病人有parkin基因第4外显子点突变，2例病人有parkin基因第5外显子点突

2、变。所有病例均未检测到parkin基因外显子缺失突变。结论散发性帕金森病病人中存在parkin基因点突变，parkin基因点突变可能是散发性帕金森病发病原因之一。【关键词】帕金森病；parkin基因；点突变帕金森病(pd)是一种由多因素、多个基因相互作用而产生的缓慢进展的神经系统变性疾病。目前人们对其确切的发病机制尚不清楚[1，2]。在对家族性pd相关基因的研究中已经发现10个染色体位点以孟德尔遗传方式与pd基因连锁。目前，已有αsynuclein基因、parkin基因、dj1基因和uchl1基因被克隆

3、[3]。其中，人们对parkin基因的研究最为广泛。1998年，kitada等[4]首次发现并克隆了parkin基因，并发现了此基因外显子的缺失。.随后的大量研究结果证实，遗传性parkin基因的突变具有明显的多样性，该基因的12个外显子均有不同程度的序列改变，其中以4、6、7最为常见，它们都处于突变的热点区域。据统计，目前我国pd病人已逾百万，其中许多是散发性pd,因此，研究散发性pd病人中parkin基因的突变情况具有一定的临床意义。本研究应用聚合酶链反应单链构象多态（pcrsscp）技术，对散发性p

4、d病人parkin基因的5个外显子进行检测分析，以了解散发性pd病人parkin基因的突变情况。　　1资料和方法　　1.1一般资料　　pd病人18例，系2007年8月～2008年5月在青岛大学医学院附属医院神经内科pd专科门诊就诊的散发性pd病人，均符合中华医学会2006年制定的pd临床诊断标准[5]，其中男11例，女7例，年龄40～80岁，平均57岁。对照组20例，系同期该院门诊健康查体者，无神经系统遗传病家族史，排除肿瘤及神经系统疾病，其中男10例，女10例，年龄30～50岁。　　1.2检测方法　　1.2

5、.1基因组dna的提取分别取受检者静脉血2ml，edta抗凝，使用上海生工生物工程公司基因组dna提取试剂盒提取基因组dna，-20℃冰箱冻存。　　1.2.2pcr引物的设计参照kitada等[4]方法设计parkin基因第3、4、5、6、7外显子的引物，序列见表1。引物由上海生工生物工程公司合成。　　1.2.3pcr扩增pcr反应体系含：dna样品3μl,2mol/ldntp2.5μl,两条20pmol/l引物各1μl,10×pcr缓冲液2.5μl,taqdna聚合酶0.25μl,加去离子双蒸水至25μl。

6、扩增条件：94℃预变性5min，94℃变性50s，58℃退火40s，72℃延伸50s，35个循环，再72℃延伸7min。pcr试剂均购自上海生工生物工程公司。　　1.2.4扩增产物的琼脂糖凝胶电泳分析将pcr产物行20g/l琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，在紫外线灯下观察确定基因是否有缺失突变。对有外显子缺失的标本,以βactin为内对照,与内对照引物共同扩增,证实缺失。　　1.2.5sscp分析将60g/l非变性聚丙烯酰胺凝胶在150v恒压、20a恒流条件下先行预电泳30min。取pcr产物7μl，加7μl

7、变性液（含有9.8g/l甲酰胺，10mol/lnaoh，20mol/ledta，0.50g/l溴酚兰，0.50g/l二甲苯氰），98℃变性10min，冰浴10min后上样，150v恒压、20a恒流条件下电泳2h。取胶，固定、银染、显色后观察结果并拍照。　　2结果　　2.1parkin基因第3～7外显子pcr扩增　　18例散发性pd病人及20例正常对照者基因组dnaparkin基因第3～7外显子pcr扩增分别获得427、261、227、268和239bp大小的特异性扩增产物，未见parkin基因外显子的缺失改变

8、。　　2.2parkin基因第3～7外显子pcrsscp检测　　4例病人第3外显子有单链泳动变位（图1），1例病人第4外显子有单链泳动变位（图2），2例病人第5外显子有单链泳动变位（图3）。　　3讨论　　pd按遗传方式可分为家族性与散发性两种，家族性pd约占pd总数的10%～15%，具有明显家族遗传倾向；而散发性pd则占pd的绝大多数，无明显遗传倾向，但表现为某种遗传易感性。早期发现的parkin