孔圣枕中丹对痴呆动物模型抗凋亡作用及机制的研究

《孔圣枕中丹对痴呆动物模型抗凋亡作用及机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、孔圣枕中丹对痴呆动物模型抗凋亡作用及机制的研究【关键词】孔圣枕中丹；血管性痴呆；细胞凋亡；bcl-2；p5AbstractObjective：ToobserveantiapoptoticeffectofKongshengZhenzhongpillonhippocampusneuronofratsentia.Methods：50algroup，modelgroup，Naofukangtreatmentgroup，KongshengZhenzhongpilltreatmentgroup1（lopusneuronandtheexpressionofbcl-2easured

2、byfloetry,theexpressionofp53munohistochemicalstaining.Results：paredodelgroup，theapoptosisrateofhippocampusneuronandtheexpressionofbcl-2pusneuronthroughupregulatingtheexpressionofp53anddecreasingtheexpressionofbcl-2.Keyentia血管性痴呆（VascularDementia，VD）是由缺血性或出血性及急、慢性缺血缺氧性脑血管疾病引起的认知障碍，以记忆减退

3、、表情淡漠、呆滞或人格改变为主要临床表现，其发病与细胞凋亡有关［1~2］。本实验对中药干预后模型大鼠海马神经细胞凋亡与bcl-2、p53蛋白表达的关系进行了研究，现报道如下。1材料与方法1.1实验材料1.1.1实验动物清洁级纯系in，再加入其他各药煮沸，浓缩制成100％浓度（相当于生药1g/mL），置于冰箱4℃储存备用。西药对照药品为脑复康（Piracetar），由天津金世制药有限公司生产，批号：20030302，实验前按0.28g/kg体重配成混悬液备用。凋亡试剂盒AnnexinV-FITCCat.NO.51-6587，PI（CatNo51-66211E）；Bcl

4、-2试剂盒Fluorescein（FITC）anti-mouseandratBcl-2，ebioscience，CatNo.11-6992；p53抗体，santacruz，CatNo:sc-6243。1.1.3实验仪器FACSCaliber流式细胞仪，美国BD公司生产（BectonDickinson），Imagepro-plus医学图像处理系统，Olympus显微镜。1.2实验方法1.2.1分组将大鼠随机分为正常组，模型组，脑复康组，孔圣枕中丹高剂量组、低剂量组，每组10只。1.2.2造模及给药除正常组外其余大鼠参照改良的四血管夹闭法制备大鼠脑缺血再灌注模型，10%

5、水合氯醛3mL/kg（体重）腹腔麻醉，取仰卧位，颈部正中切口，分离双侧颈总动脉，穿线备用，用微型动脉夹关闭双侧颈总动脉10min，再通10min，反复3次，撤线，缝合［3］。正常组与模型组用生理盐水灌胃，每日1次；脑复康组灌胃西药脑复康10mL/kg，孔圣枕中丹高、低剂量组分别给孔圣枕中丹l3.5g/kg、9.0g/kg，灌胃给药，每日1次，连续14d。第15d用4%多聚甲醛灌注固定后断头取脑备用。1.2.3指标观察1.2.3.1神经元细胞凋亡率检测各组大鼠断头后迅速取脑组织海马区，制备单细胞悬液，调整细胞数为1×106/mL。吸取100μL细胞悬液，加5μLAnn

6、exinV-FITC和5μLPI，充分混匀细胞，避光25℃染色15min，用流式细胞仪检测细胞凋亡率。1.2.3.2bcl-2蛋白表达细胞悬液的制备同1.2.3.1。按细胞内蛋白染色方法，加入20μLFITC标记的bcl-2抗体，避光染色30min，用流式细胞仪检测bcl-2蛋白表达的荧光值。1.2.3.3p53蛋白表达采用免疫组织化学法检测。脑组织常规固定、包埋、切片，梯度脱蜡、脱水，过氧化氢室温灭活内源性酶，柠檬酸盐溶液微波修复抗原后，血清封闭抗原，滴加适当稀释的一抗，4℃过夜。滴加生物素化二抗，37℃20min，DAB显色，脱水，透明，封片。选取海马区G1区，

7、图像分析仪上检测平均光密度值。1.3统计方法数据统计以SAS软件单因素方差分析进行处理，计量资料数据以均数±标准差（■±s）表示。2结果2.1孔圣枕中丹对痴呆大鼠神经元细胞凋亡率的影响结果见表1。由表1可见，给药后脑复康组、孔圣枕中丹低剂量组、高剂量组与模型组比较，海马神经细胞凋亡率明显降低（P＜0.05），但3组之间比较无显著性差异。2.2孔圣枕中丹对痴呆大鼠神经元细胞bcl-2、p53表达的影响结果见表2。由表2可知，与正常组比较，模型组海马神经细胞bcl-2表达明显降低，p53表达明显增高；与模型组比较，脑复康组、孔圣枕中丹低、高剂量组海马神经bcl-2表