人参皂甙rg1对脑缺血再灌注大鼠pjnk表达的影响

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1、人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠pJNK表达的影响【关键词】人参皂甙Rg1脑缺血再灌注pJNK大鼠　　Abstract:ObjectiveTodiscusstheeffectsofGinsenosideRg1ontheexpressionsofJNKintheratsbraintissueafterfocalcerebralischemia-reperfusionanditssignificance.MethodsRats-operativegroup,Modelgroup,GinsenosideR

2、g1groupsof10mg/kg,20mg/kg,40mg/kg,andNimodipinegroupof1mg/kgatrandom.Themethodofmiddlecerebralarteryocclusion(MCAO)inratsodelofcerebralischemia-reperfusion,andthentheexpressionsofJNKaftercerebralischemia-reperfusion6hicalmethodinimmunitytissue.ResultsTh

3、epositiverateofexpressionofratsbraintissueineachoftheGinsenosideRg1groupsis(23.89±6.77),(15.19±4.59),(9.15±4.77)respectively.ConclusionsTheresultsshoechanismofGinsenosideRg1toprotectthebraincellsfromdamageaftercerebralischemia-reperfusioninjurymaybeass

4、ociatedoreeffectiveia-reperfusion;JNK；rat　　研究表明，人参皂甙Rg1能通过抑制细胞凋亡对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用，但其抗凋亡的机制还不十分清楚［1］。丝裂原蛋白激酶信号通路(mitogenactivatedproteinkinases，MAPKs)是脑缺血再灌注损伤中主要的信号通路，它包括5个亚家族，其中c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminalkinases，JNKs)亚家族主要参与细胞凋亡的调控。本实验拟采用免疫组织化学方法检测脑缺血再灌注

5、后大鼠海马CA1区神经元pJNK的表达，并观察人参皂甙Rg1对pJNK蛋白表达的影响，以明确人参皂甙Rg1是否通过JNK信号通路来抑制脑缺血再灌注后的神经元凋亡。　　1材料与方法　　1.1实验动物分组与给药方法　　Sprage-Dag/kg）；尼莫地平药物对照组（1mg/kg）；每组5只大鼠。③～⑥组分别于术前5d至取材当日腹腔注射人参皂甙Rg1、尼莫地平，其余各组分别注射等量等渗生理盐水，1次/d。　　1.2药品及试剂　　人参皂甙Rg1(纯度>95%)购自吉林大学有机化学教研室；尼莫地平注射液

6、(批号为071001)，购自山西亚宝药业；其它药品均为国产分析纯，由辽宁医学院科学实验中心提供。　　1.3大鼠右侧局灶性脑缺血(MCAO)模型的制备　　10%水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉，采用改良线栓法［2］制备大鼠局灶性脑缺血模型。线栓采用头端光滑烫圆的直径0.23mm鱼线，长度由右侧颈外动脉分叉部计约（18.5±0.5）mm。栓塞2h后，将鱼线轻轻拔出并缝合皮下筋膜及皮肤，即为再灌注模型，再灌注时间为4h。　　1.4免疫组织化学染色及图像分析　　MCAO术后6h，将各组大鼠麻醉，4%多聚甲

7、醛灌流固定，断头取脑，梯度酒精脱水，定向石蜡包埋切片，厚5μm。切片常规脱蜡至水，免疫组化Envision法染色：3%过氧化氢溶液处理15min以去除内源性过氧化物酶；然后采用pH6.0枸椽酸缓冲液高压修复抗原，自然冷却至室温后；滴加1∶200稀释的pJNK单克隆抗体4℃孵育过夜；然后滴加辣根酶标记羊抗兔多聚体（PV6001）37℃孵育30min。每步骤之间用0.01MPBS洗3次，每次5min。DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，中性树胶封片，光学显微镜下观察。阴性对照用PBS替代一抗［2］。pJN

8、K蛋白阳性定位于神经元的细胞核，呈棕黄色。　　采用CIAS-1000型细胞图像分析系统进行阳性细胞计数。每例标本等间隔选取切片3张，每张切片随机选取右侧海马CA1区2个不重叠高倍视野(400倍)，计数每个视野下细胞总数及阳性细胞数量，计算表达阳性率=（阳性细胞数/细胞总数）%［3］。　　1.5统计学分析　　应用SPSS10.0软件分析，所有数据均用±s表示。多组间差异显著性检验采用单因素方差分析及两两比较的q检验。　　2结果　　　　2.1pJNK蛋白免疫