化瘀理肺方对大鼠肺纤维化形成的干预作用及对smad7表达的影响

《化瘀理肺方对大鼠肺纤维化形成的干预作用及对smad7表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、化瘀理肺方对大鼠肺纤维化形成的干预作用及对Smad7表达的影响【摘要】　　目的研究化瘀理肺方对大鼠肺纤维化形成的干预作用及可能作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、激素组，用1%戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔内注射麻醉后，经气管内插管注入博莱霉素(5mg/kg)建立肺纤维化模型，对照组注入生理盐水0.25ml，从造模后的第2天起分别给予化瘀理肺方药物灌胃（中药组，13410mg/kg）、生理盐水灌胃（对照组、模型组）、氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射（激素组，25mg/kg）进行干预，后于给药后

2、的第14、28天分别处死，取肺组织行苏木素伊红（HE）染色观察病理变化情况，免疫组化法测定肺组织中Smad7蛋白的表达情况。结果中药组肺泡炎和纤维化程度明显低于模型组和激素组，中药组Smad7蛋白表达明显高于模型组和激素组（P＜0.01）。结论化瘀理肺方对博莱霉素所致肺纤维化大鼠有一定预防性治疗作用，可能通过促进Smad7蛋白表达发挥作用。【关键词】肺纤维化；化瘀理肺方；smad7；组织芯片　　肺纤维化是一种渐进性致死性疾病，发病机制尚不完全明确，目前对于肺纤维化的治疗主要是基于抑制炎症可阻止肺纤维化进

3、展这一观念，一般采用激素治疗，但疗效甚微，仅对20%的肺纤维化患者有效，而且常常为一过性反应〔1〕，应用免疫抑制剂或细胞毒类药物对某些肺纤维化病人作为第二线药物用于治疗，不仅存在潜在的严重副作用，而且对肺纤维化治疗基本无效。化瘀理肺方是以“化瘀理肺、畅利气机”为治则组成的中药方剂，本课题拟通过动物实验研究化瘀理肺方对大鼠肺纤维化模型的干预作用，并用组织芯片和免疫组化相结合的办法检测Smad7蛋白表达，探讨其可能作用机制。　　1材料与方法　　1.1动物与分组　　雄性g/ml的溶剂，高压灭菌，4℃冰箱保存备用

4、；注射用盐酸博莱霉素(15mg/支)由日本化药株式会社生产，产品批号为950330，使用时以生理盐水配成1mg/ml；氢化可的松琥珀酸钠（50mg/支）购自天津市生物化学制药厂，产品批号为20060301；Smad7抗体（0.2ml,200μg/ml）及链霉亲和素过氧化物酶复合物(SABC)免疫组化试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。　　1.3模型的建立与标本处理　　用1%戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔内注射麻醉，固定四肢及头部，在额镜直视下，将与1ml注射器相连的带接头硬脊膜外麻醉导管插入气管，

5、注入0.4%博莱霉素0.25ml(5mg/kg)，对照组注入生理盐水0.25ml作为正常对照，注药后立即将动物直立旋转，使药物在肺内分布均匀。次日开始，中药组每天给予化瘀理肺方药物灌胃（13410mg/kg），激素组每天给予氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射(25mg/kg)，对照组和模型组每天给予生理盐水（2ml/只）灌胃。给药后第14和28天每组各处死5只大鼠（中药组处死7只），取右肺中叶置于10%中性甲醛固定，石蜡包埋、切片，HE染色。　　1.4组织芯片的制作　　按刘卫平等〔2〕的方法制作组织芯片，具体步骤

6、如下：制作空白石蜡块，根据样本的数量在空白石蜡块上钻孔(选用钻头的直径约2mm)，在HE染色切片上选取具代表性的部位并标记，再用金属空心管(内径约2mm)从经定位的目标石蜡块上钻取组织，并转移到已钻孔的空白石蜡块的相应位置，将蜡块置40℃烤箱内数天,使组织与石蜡充分融合，按常规方法连续切片,厚4μｍ，裱于10%多聚赖氨酸处理的载玻片上,56℃烤片3ｈ以上，供免疫组化染色。　　1.5免疫组化染色　　免疫组化染色采用链霉亲和素生物素酶复合物(SABC)法进行，具体实验步骤严格按照试剂盒说明书进行操作。　　

7、1.6观测指标　　1.6.1肺泡炎、肺纤维化程度判断　　HE切片按Szapiel等〔3〕的方法确定肺泡炎和肺纤维化的程度：（1）肺泡炎分级：0级:无肺泡炎(-)；1级:轻度肺泡炎(+)，受累面积小于全肺20%；2级:中度肺泡炎()，占20%～50%；3级:重度肺泡炎()，受累面积大于50%。（2）肺间质纤维化分级：0级:无肺间质纤维化(-)；1级:轻度肺间质纤维化(+)，病变范围局限在全肺20%以下；2级:中度肺间质纤维化()，病变范围占全肺20%～50%；3级:重度肺间质纤维化()，病变范围大于

8、50%，肺泡融合，肺实质结构紊乱。-为0分，+为1分，为2分，为3分，将等级资料转化为计量资料。　　1.6.2免疫组化染色程度判断　　免疫组化染色以细胞中出现黄色或棕黄色颗粒为阳性反应。半定量判定根据Wilentz等〔4〕的标准略做修改：染色强度Ａ:无色、淡黄、棕黄、棕褐分别计为0、1、2、3分；染色广度Ｂ:阳性细胞数占总细胞数的百分比；Ａ、Ｂ两项所得相乘所得数值为免疫组化染色指数。　　1.7统计学处理　　采用SPSS13