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1、皮肤淋巴瘤中cyclinE的表达及临床意义【摘要】目的：探讨cyclinE在皮肤淋巴瘤中的表达及其在肿瘤的发生和发展中的作用。方法: 收集武汉大学人民医院病理科2006年～2009年手术切除及活检经病理明确诊断的皮肤淋巴瘤蜡块40例,其中22例MF、7例皮肤间变性大细胞淋巴瘤、6例其他类型的T细胞淋巴瘤、5例B细胞淋巴瘤。另外20例皮肤炎症病变,包括10例银屑病、10例副银屑病。采用免疫组织化学方法观察各组组织内cyclinE的表达。利用HPIAS2000图像分析系统测定cyclinE在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果：皮肤淋巴
2、瘤中cyclinE呈高表达;癌旁组织中cyclinE呈低表达。图像分析结果显示：皮肤淋巴瘤与皮肤炎症病变之间cyclinE的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.05)。结论：cyclinE异常高表达促进细胞增殖,从而在皮肤淋巴瘤发病过程中起重要作用。【关键词】皮肤淋巴瘤;cyclinE;免疫组织化学;图像分析 皮肤淋巴瘤是皮肤恶性肿瘤之一,对皮肤淋巴瘤的分子生物学研究表明许多基因及细胞因子在皮肤淋巴瘤的发生发展过程中发挥重要作用,有不可忽视的临床意义[1，2]。 细胞周期是细胞物质积累和细胞分裂的循环过程,其有序进行受到严密
3、的调节和控制。细胞无限性增殖是恶性肿瘤的重要特征,这与细胞周期运行障碍导致细胞生长失控有密切关系。cyclinE是细胞周期中重要的调控因子,主要作用于G1期和S期,是DNA复制的重要启动因子。其异常表达与肿瘤的发生发展关系密切[3，4]。 为探讨cyclinE与皮肤淋巴瘤的发生发展的关系及临床意义,本研究采用免疫组化的方法对皮肤淋巴瘤中cyclinE表达情况进行了检测,以期为皮肤淋巴瘤的早期诊断提供参考指标。 1材料和方法 1.1材料 1.1.1材料收集武汉大学人民医院病理科2006年～2009年手术切除及活检经病理明确诊断的皮肤淋巴瘤蜡
4、块40例,其中22例蕈样肉芽肿(MF)、7例皮肤间变性大细胞淋巴瘤、6例其他类型的T细胞淋巴瘤、5例B细胞淋巴瘤。另外20例皮肤炎症病变,包括10例银屑病、10例副银屑病。 1.1.2材料分组将所有标本进行常规HE染色,将实验分为2组:皮肤淋巴瘤组和皮肤炎症病变组。 1.2方法 1.2.1常规脱水、透明、石蜡包埋、切片及HE染色。 1.2.2免疫组织化学SP法检测cyclinE相关抗原。 1.2.3具体步骤：①4μm组织切片常规脱蜡至水后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;②抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然
5、冷却后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗5×3min;③滴加3%过氧化氢，37℃湿盒孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;④正常羊血清37℃湿盒孵育10min以减少非特异性背景;⑤甩去多余血清，分别滴加一抗(cyclinE浓度1:50)，4℃孵育过夜，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×5min;⑥滴加生物素标记的二抗37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;⑦滴加链霉素抗生物素蛋白-过氧化物复合物37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3
6、×3min;⑧滴加新鲜配置的DAB显色液显色，光镜下控制反应时间(约3～5min)，自来水冲洗终止反应;⑨苏木素复染，流水冲洗，1%盐酸酒精分色数秒，流水冲洗，0.1%氨水返蓝;⑩梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检;用PBS代替一抗作为阴性对照组，购买的阳性片作为cyclinE的阳性对照组。 1.2.4免疫组织化学结果判断 cyclinE以细胞核或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应，阴性对照组除细胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。 采用HPIAS1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏影像公司)对cyclinE的表达进行定量
7、分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野(×400),测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率(阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100%)。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。 1.3统计学处理 数据以均数±标准差表示，用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验,检验水准α为0.05。 2结果 cyclinE的表达皮肤炎症病变组:皮肤炎症病变内可见少量的棕黄色颗粒
8、,cyclinE表达弱或无表达;皮肤淋巴瘤组:皮肤淋巴瘤内可见密集分布的棕黄色颗粒，cyclinE表达强。图像分析结果显示：皮肤炎症病变
