血管紧张素ⅱ和去甲肾上腺素致心肌肥厚作用的实验研究-

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1、血管紧张素Ⅱ和去甲肾上腺素致心肌肥厚作用的实验研究*作者：付锦孙冰张一娜尚宏【摘要】目的比较血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和去甲肾上腺素(NE)致SD大鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞蛋白合成作用的特点及机制，探讨AngⅡ和NE受体拮抗剂对心肌肥厚的逆转作用。方法检测心肌细胞3H-leu掺入和心肌成纤维细胞3H-TdR掺入率。结果10-6M的NE可明显增加心肌细胞3H-leu掺入(P<0.01)；等量哌唑嗪(PRAZ)及普萘洛尔(pronel)可阻断这一作用。NE可以增加心肌成纤维细胞的3H-TdR掺入(P<0.01)，等量pronel可以完全阻断其

2、作用。10-6MAngⅡ能够明显增加心肌成纤维细胞的3H-TdR掺入(P<0.01)及心肌细胞3H-leu掺入(P<0.05)；心肌成纤维细胞培养上清液，使心肌细胞3H-leu掺入增加更显著(P<0.01)。AT1受体拮抗剂可以完全阻断其作用。结论α1、β受体拮抗剂和AT1受体拮抗剂均可阻断心肌细胞蛋白合成。β受体拮抗剂和AT1受体拮抗剂尚可阻断心肌成纤维细胞增殖。【关键词】心肌肥厚去甲肾上腺素血管紧张素Ⅱ【Abstract】ObjectiveTostudyandparetheroleanditsmechanismofnorepin

3、ephrine(NE)andangiotensinⅡ(AngⅡ)toinducecardiachypertrophy.MethodsCardiomyocyte(CM)andcardiacfibroblast(CFB)inSDrateconcentrationcouldblocktheseeffects.Moreover，NEcouldaugment3H-TdRincorporationofCFB，proneleamountcouldblockthiseffectpletely.10-6MAngⅡcouldenhance3H-leuincorporat

4、ionofCM(P<0.01)and3H-TdRincorporationofCFB(P<0.01)，moreover，3H-leuincorporationofCMcouldbeincreasedfurtherafteraddingsupernatantofculturedCFB(P<0.01).Theeffectsentbasisforearlyusageofα1andβreceptorantagonistandAT1receptorantagonisttopreventcardiachypertrophyclinically，

5、especiallycardiacinterstitialhypertrophy.【Keypson改良法分离和收集细胞，细胞收集于含20%胎牛血清的DMEM中。按1×105/孔细胞浓度接种于24孔板，5%CO2，37℃的培养箱中孵育48h换培养基，72h后换无血清培养基，再培养24h进入实验，分组加干预因素。1.1.2心肌成纤维细胞(CFB)培养取新生1d的SD乳鼠心脏，采用酶解法将左心室肌消化成单细胞悬液，经差速贴壁分离法分离出CFB，应用含20%胎牛血清的DMEM于37℃，5%CO2的培养箱中孵育每3d换液1次，第2代细胞进入实验。经上述方法制备

6、的CFB波形蛋白抗体免疫组化染色阳性细胞占90%以上。1.1.3CM3H-leu掺入的测定加药物干预的同时，在培养孔中加入1μCi3H-亮氨酸(3H-leu购于中国原子能研究院)，培养24h终止反应，去培养液，用预冷的10％三氯乙酸于4℃固定30min，然后用平行盐溶液洗2次。最后用0.1mol/LNaOH溶液裂解细胞，37℃放置过夜。次日放入有闪烁液的测量杯中，液闪计数仪上测放射性强度。1.1.4CFB3H-TdR掺入的测定细胞以2.5×104/孔接种于24孔板，48h后换以无血清培养基孵育48h，使细胞处于G0/G1期，换培养基加药物干预的同时，

7、在培养孔中加入1μCi3H-腺苷(3H-TdR购于中国原子能研究院)，培养24h终止反应，0.45μl微孔滤膜负压抽滤，生理盐水和10％三氯乙酸先后冲洗滤膜，滤膜干燥后置于内含4mlPPO/POPOP/二甲苯闪烁液的闪烁瓶中过夜，液闪计数仪上测放射性强度。1.2实验分组1.2.1CM组按1×105/(孔·200μl)将CM接种于24孔板，一共6组，每组设4个平行孔：(1)对照组(C)；(2)NE组(N)；(3)NE+α1受体拮抗剂哌唑嗪(PRAZ)组(N+PRA)；(4)NE+β受体拮抗剂心得安(pronel)组(N+Pro)；(5)AngⅡ组(A)

8、；(6)AngⅡ+AngⅡ1型受体(AT1)拮抗剂洛沙坦(losartan)组(A+L)。NE、pronel