壳寡糖抗肿瘤作用及免疫调节机理的研究-

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1、壳寡糖抗肿瘤作用及免疫调节机理的研究*作者：吴海明，华晓阳，何登全【摘要】目的研究壳寡糖对小鼠肿瘤生长和转移的抑制作用以及壳寡糖对培养的巨噬细胞相关的细胞因子表达的影响。方法接种肿瘤的小鼠尾静脉注射壳寡糖，观察壳寡糖对肿瘤的生长和抑制作用。用相对定量的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测壳寡糖对巨噬细胞相关细胞因子转录和翻译水平的影响。结果壳寡糖对S180肉瘤的抑瘤率为35.02%（P＜0.001)，对Leetastasisoftumorinrats，andinexpressionofcytokinesassociatedacrophage.Meth

2、odsInhibitionofgrooracrophageeasuredbyRT-PCRandELISAtechniques.ResultsInhibitionrateofsaraS180etastasisofLeentgroup（2.1±1.73），controlledgroup（4.0±2.14）.24hsafteroligochitosanaddedtomacrophage，expressionofcytokineincreasedsignificantly(P＜0.01).ConclusionOligochitosancaninhibitgroetastasisoftumor，an

3、denhanceexpressionofcytokinesassociatedacrophage.【Keyor；macrophage；cytokine甲壳素是自然界丰富的生物资源之一，其部分脱乙酰化产物壳聚糖，具有抗肿瘤、免疫调节、抑菌等多种生理功能。但壳聚糖不溶于水，利用纤维素酶将其降解为壳寡糖，具有较好的水溶性易被人体吸收，本实验旨在研究壳寡糖对实验性小鼠S180肿瘤和Learker和ELISA实验试剂由上海贝西科技公司提供。1.2方法1.2.1壳寡糖抗肿瘤作用实验方法无菌取S180肉瘤和Lel的细胞悬液；皮下注射肿瘤液于ICR种小鼠（0.2ml/只），次日分组进行实验，每组10只IC

4、R种小鼠。实验组尾静脉注射100mg/kg的壳寡糖，对照组注射生理盐水，停药次日处死小鼠，剥离实体瘤称重或观察转移病灶数，计算抑瘤率（%）。1.2.2壳寡糖对巨噬细胞相关细胞因子表达的影响实验方法培养小鼠采用RT-PCR法和ELISA法研究壳寡糖对巨噬细胞IL-1、TNF-a和IL-18的基因表达的影响：实验组和对照组巨噬细胞→分别提取RNA和收集上清液→RT-PCR法检测mRNA水平基因表达的变化以及ELISA法检测蛋白表达量的变化。1.3统计学方法各组值均采用均数±标准差（x±s）表示，组间采用t检验，P＜0.05为统计学差异有显著性意义。2结果2.1壳寡糖抗肿瘤作用壳寡糖对小鼠S18

5、0肉瘤生长的影响（见表1），从表中可以看出实验组的抑瘤率为35.02%（P＜0.001），环磷酰胺组的抑瘤率为50.16%（P＜0.001）。壳寡糖对Lel的剂量加入壳寡糖继续培养，各组巨噬细胞样本经RT-PCR法结果见表3、4、5。表3不同浓度壳寡糖对巨噬细胞IL-1β基因转录水平的影响注：以β-actin为内参照标准，各组均值以均数±标准差表示；*表示经t检验与对照组差异有显著性，P＜0.05(n=4)表4不同浓度壳寡糖对巨噬细胞IL-18基因转录水平的影响注：以β-actin为内参照标准，各组均值以均数±标准差表示；◆表示经t检验与对照组差异有显著性，P＜0.05，*表示经t检验与对

6、照组差异有显著性，P＜0.01(n=4)表5不同浓度壳寡糖对巨噬细胞TNF-α基因转录水平的影响注：以β-actin为内参照标准，各组均值以均数±标准差表示；*表示经t检验与对照组差异有显著性，P＜0.05(n=4)结果显示10μg/ml的壳寡糖实验组与对照组比较无显著性差异，20、30及40μg/ml组均差异有显著性，故确定20μg/ml的壳寡糖为对IL-1β和TNF-α的最适作用浓度，以40μg/ml的壳寡糖作为对IL-18的最适作用浓度。2.2.320μg/ml的壳寡糖对IL-1β和TNF-α的转录和翻译水平的影响用含20μg/ml壳寡糖刺激培养的巨噬细胞，用RT-PCR法检测壳寡糖

7、对IL-1β和TNF-α转录的水平的影响，用EiSA法检测壳寡糖对IL-1β和TNF-α分泌的影响（见表6、7、8、9）。2.2.440μg/ml壳寡糖对IL-18基因转录水平和翻译水平的影响用含40μg/ml壳寡糖的细胞培养液培养巨噬细胞，RT-PCR检测对IL-18基因转录水平的影响ELISA法检测对IL-18细胞因子分泌的影响（见表10、11）。表620μg/ml壳寡糖对IL-1β基因转录水平的影响注：以β-act