通光藤抗肿瘤的化学成分分析

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1、通光藤抗肿瘤的化学成分分析　　通光藤始载于《滇南本草》，为萝藦科植物通光散Marsdeniatenacissima(Roxb.)arsdeniatenacissima(Roxb.)MC-7721(人肝癌细胞株)，MGC-803(人胃癌细胞株)，BGC-823(人低分化胃腺癌细胞株)，A549(人肺癌细胞株)，NCI-H460(人大细胞肺癌细胞株)，Eca-109(人食道癌细胞株)，CaEs-17(人食道癌细胞株)，以上细胞株均由南京中医药大学海洋药物中心药理毒理室细胞库提供。DM1L型倒置显微镜(德国莱卡公司)；SI-1640培养基(美国Invitroge

2、n公司，批号：20110313)；新生小牛血清(FCS，中美合资兰州民海生物工程有限公司，批号：20110621)；四甲基偶氮唑盐(MTT，Amresco公司，批号：20101203)；胰蛋白酶(Amresco公司，批号：20110112)。　　2、方法与结果　　2.1提取分离　　通光藤干燥药材20kg，经适当破碎，15倍量95%乙醇回流提取2次，合并提取液，回收乙醇，所得浸膏分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。取正丁醇层提取物200g进行硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，各流份反复分离、纯化，得到化合物1~3，重量分别为15，8，32mg。　　利

3、用核磁共振波谱学方法进行结构测定。　　2.2结构鉴定　　化合物1：mp142~143℃。1H-NMR(300MHz，C5D5N)：4.75(2H，d，J=4.5Hz，2，3-H)，4.99(2H，d，J=2.6Hz，4，1-H)，6.20(2H，brs，5，6-H)。13C-NMR(C5D5N)：130.9(5-C，6-C)，74.7(2-C，4-C)，70.9(1-C，3-C)。经与文献对照，波谱数据一致，鉴定为牛奶菜醇(环己烯四醇，conduritol)，结构式见图1。　　　化合物2：mp156~158℃。1H-NMR(300MHz，DMSO)中，&d

4、elta;4.8~0可见32个质子信号，结合13C-NMR(DMSO)21个碳信号，其中包括δ211.1羰碳，δ90~60间5个连氧碳，δ55~0间15个饱含烷烃信号，初步推测为C21甾体类化合物。1H-NMR：δ0.90(3H，s)，1.02(3H，s)提示为甾体母核18，19甲基信号，δ2.18(3H，s)给出另外一孤立甲基信号，且应与sp2杂化碳相连，δ4.38(1H)、4.38(1H)、4.13(1H)在HSQC中无法找到碳信号的归属，且在HMBC谱中与分别与δ73

5、.0，68.9，65.2这3个连氧碳远程相关，提示为甾核3个羟基质子信号；δ：70.9，69.3连氧碳在HMBC、HSQC谱中均找不到相关点，提示具有环氧结构。综合以上分析，并对照文献[3]中报道的波谱数据，确定该结构为通光藤苷元B。此苷元为在植物中首次分离得到，以往的报道均为皂苷水解获得，波谱数据见表1，结构式见图2。　　　　化合物3：mp156~158℃，1H-NMR(300MHz，C5D5N)δ1.16(3H，s，C19-CH3)，1.42(3H，d，J=6.3Hz，C21-CH3)，1.48，1.55，1.59(各3H，d，

6、J=6.3Hz，糖上C6-CH3)，1.86(3H，s，C18-CH3)，3.58，3.61，3.88(各3H，s，糖上3位-OCH3)，4.43(1H，q，J=6.1Hz，C20-H)，4.71(1H，d，J=7.5Hz，糖上端基H)，5.10，5.19(各1H，dd，J=10.0，2.0Hz，糖上端基H)，表明有2个去氧糖，且3个糖均为β构型。将化合物的光谱数据与文献报道[4]对照，其1H-NMR、13C-NMR数据与大叶牛奶菜苷丁(marsdekoisideD)完全一致，故确定其结构为大叶牛奶菜苷丁，波谱数据见表2，结构式见图3。　　　　2

7、.3抗肿瘤活性　　称取化合物1~3各100mg，加入1mL生理盐水，3000rmin-1离心10minL-1，吸取上清液，浓度为100mgmL-1，用培养液依次稀释至2.5mgmL-1，250，25?gmL-1备用。MTT法测定化合物1~3样品对HepG2、ISMMC-7721、MCG-803、BGC-823、A549、NCI-H460、Eca-109、CaEs-178种细胞株增殖的影响，以肿瘤细胞抑制率为指标观察其抗肿瘤作用，计算IC50，结果见表3。　　　　3、讨论　　通光藤的抗肿瘤疗效确切，但其抗肿瘤活性物质基础研究工作报道较少。本次实验在通光藤的主

8、要活性部位中提取得到了3个化合物，分别为C21甾体类和环醇类。通过