油茶种子抗肿瘤有效部位群化学成分含量的分析方法

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1、油茶种子抗肿瘤有效部位群化学成分含量的分析方法作者：李红冰，陈跃龙，石海峰，唐玲，冯宝民，王永奇【摘要】　　目的建立准确简便测量油茶种子中抗肿瘤有效部位群化学成分含量的分析方法。方法采用分光光度法。结果油茶种子60%丙酮-水提物中总皂苷纯度为64.90%，总黄酮含量为11.81%，总酚含量为7.40%(其中鞣质占2.43%)。结论分光光度法测定以上3种物质简便易行，准确可靠,重复性和回收率都较理想。【关键词】油茶种子；抗肿瘤；总皂苷；黄酮；多元酚；鞣质　　Abstract：ObjectiveToestablisht

2、heaccurateandconvenientmethodfordeterminingthecontentsoftotalsaponin,totalflavonoids,totalpolyphenolandtannininCamelliaolEiferaAbel.MethodsThecontentsinedbyspectrophotometry.ResultsThecontentsoftotalsaponin,totalflavonoids,totalpolyphendandtanninethodisconveni

3、entandreliableforthedeterminationofthethreesubstances,anditsreproducibilityandrecoveryratearefairlyelliaolEIferaAbel.;Anti-tumor;Saponins;Flavonoids;Polyphenols;Tannin油茶CamelliaoleiferaAbel属于山茶属山茶亚属油茶组植物。中国有油茶面积3660000ha，年产油茶种子645000t［1］，资源非常丰富。但长期以来，对油茶药用价值方面

4、的研究，国内外鲜有报道。我们课题组在对油茶药用价值进行研究的过程中，采用MTT比色法对其种子和油粕的石油醚、乙醇、水、60%丙酮-水的梯度溶媒提取物进行体外抗癌实验，结果表明油茶种子60%丙酮-水提取物对人肺癌细胞株（A549）、人胃癌细胞株(SGC－7901)和人黑色素细胞瘤（A375）具有非常强的抑制作用。定性分析结果表明其含有大量皂苷、黄酮及多元酚类成分。为进一步明确其抗肿瘤的有效部位及有效成分,本文对该有效部位群中的三大类成分进行了定量分析,为抗肿瘤有效部位的分离纯化提供科学依据。　　1仪器与材料unico

5、7200可见分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司）；Laborata4000型旋转蒸发仪（Heidolph公司）；BP210S十万分之一电子天平（Sartorius公司）；Jascov-560紫外可见分光光度计；油茶总皂苷对照品（湖南今汉生有限公司）；芦丁对照品（东京化成工业株式会社）；没食子酸（中国药品生物制品检定所）；所用试剂均为分析纯；水为蒸馏水；油茶种子（2006-03采集于广西壮族自治区燕洞乡）。　　2方法与结果　　2.1总皂苷的测定［2］　　2.1.1标准品溶液的制备精密称取干燥至恒重的油茶总皂苷对照品5

6、0mg，置100ml容量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.5mg/ml的对照品溶液，备用。　　2.1.2供试品溶液的制备精密称取干燥至恒重的样品20mg，甲醇溶解并定容至10ml容量瓶中，制得浓度为2.0mg/ml的样品溶液，备用。　　2.1.3测定波长的选择取0.8ml的对照品溶液及样品溶液，分置于具塞试管中，挥去甲醇，精密加入新鲜配制的5%香草醛溶液0.2ml，高氯酸0.8ml加塞，于60℃水浴中反应15min，取出，冰水中冷却至室温，精密加入冰乙酸5.0ml，摇匀立即在紫外分光光度计450～700

7、nm波长下扫描，同时空白溶液做参比，确定检测波长为588nm。　　2.1.4标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液0.0,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0ml，分置于具塞试管中，挥去甲醇，精密加入新鲜配制的5%香草醛溶液0.2ml，高氯酸0.8ml加塞，于60℃水浴中反应15min，取出，冰水中冷却至室温，精密加入冰乙酸5.0ml，摇匀，随行做空白实验，588nm波长下测吸光度。计算得回归方程为：Y=0.467X-0.0082(r=0.9999)。线性范围为0.2～1.0mg/ml。　　2.1.5样品测定精密吸取供

8、试品溶液0.5ml，置于具塞试管中，挥去甲醇，照标准曲线项下的方法操作，测定吸收值，从标准曲线中读出供试品溶液中总皂苷的量，计算，即得。　　2.1.6重复性实验精密吸取供试品溶液0.5ml置于具塞试管中，挥去甲醇，照标准曲线项下的方法操作，测定吸收值，平行测定5次，代入回归方程，计算总皂苷的含量。结果见表1。表1总皂苷测定的重复性实验结果（略）　　2.1.7