马尾松_蒎烯合成酶基因cdna全长克隆及序列分析

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2014，42(13):3808－3811责任编辑石金友责任校对李岩马尾松α-蒎烯合成酶基因cDNA全长克隆及序列分析1，32*33王颖，刘振宇，吕全，张星耀(1．东北林业大学林学院，黑龙江哈尔滨150040;2．山东农业大学植物保护学院，黑龙江哈尔滨150040;3．中国林科院森环森保所，北京100081)摘要［目的］分离克隆马尾松α-蒎烯合成酶基因cDNA全长。［方法］根据其他松科植物α-蒎烯合成酶基因保守区域设计引物，扩增出基因的部分片段，再结合ＲACE技术分别扩增出

2、基因3’端和5’端序列，通过序列拼接获得cDNA全长，结合生物信息学软件分析该基因编码蛋白的特性。［结果］马尾松α-蒎烯合成酶基因cDNA全长为2103bp，编码区1980bp，编码629个氨基酸，含有1个N端结构域、1个金属结合结构域和1个天冬氨酸富集基序(DDMYD)。［结论］该方法成功克隆了马尾松α-蒎烯合成酶基因cDNA全长序列，具有单萜烯合成酶基因的典型特征，序列提交至GenBank，获得登录号KF547035。关键词马尾松(Pinusmassoniana);蒎烯合成酶基因;ＲACE中图分类号S791．248文献标识码A文

3、章编号0517－6611(2014)13－03808－04CloningandSequenceAnalysisofα-PineneSynthaseGenefromPinusmassonianaWANGYing，LIUZhen-yuetal(CollegeofForestry，NortheastForestryUniversity，Harbin，Heilongjiang150040;SchoolofPlantPro-tection，ShandongAgriculturalUniversity，Harbin，Heilongjiang15

4、0040)Abstract［Objective］Toclonethefull-lengthofα-pinenesynthasegenefromPinusmassoniana．［Method］Accordingtohighconservativeaminoacidsofreportedα-pinenesynthasegenefrompinaceaes，apairofdegenerateprimerswasdesignedandpartialfragmentwasobtainedbyPCＲamplification．Basedonthi

5、sknownsequence，somenewprimersweredesigned，twoterminalsgenesequencewereclonedby3’ＲACEand5’ＲACErespectively．Aftersplicingthefragmentsofsequence，analyzedthestructuresandfunctionofthecodedproteinbybioin-formaticssoftwares．［Ｒesult］Thefull-lengthcDNAofα-pinenesynthasegenecon

6、sistsof2103bp，containsa1890bpopenreadingframe(OＲF)encoding629aminoacidproteins，includingN-terminaltransitpeptide，metal-bingingdomainandDDXXDmotif．［Conclusion］Thefull-lengthcDNAofα-pinenesynthasegenewascloned，whichhasthetypicalcharacteristicsofmonoterpenesynthasegene．Th

7、esequencehasbeensubmittedtoGeneBank，accessinNo．KF547035．KeywordsPinusmassoniana;PineneSynthaseGene;ＲACE马尾松(Pinusmassoniana)是我国特有的一种综合利用酶基因cDNA全长，并分析该基因的特性，以期为马尾松响应价值较高的经济树种，分布广泛，种植面积居全国针叶林首病虫害的分子防御机制研究提供参考。位，然而马尾松也是发生病虫害较多的树种，如松材线虫、马1材料与方法［1］尾松毛虫、松梢螟及赤枯病等。近20～30年来，以松材线

8、1．1材料供试材料为3年生马尾松，购买于浙江省淳安虫病最为严重，该病致死速度快、传播蔓延迅速，导致马尾松县国有林场，在现代化温室中培养。大面积死亡，森林生态遭到严重破坏，同时也带来巨大的经1．2方法济损失。1．2．1马尾松总ＲNA提取