酵母培养操作规程

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1、酵母培养操作规程本文主要介绍酵母的选育、保种、培养的操作工艺等。目        录第一章  酵母扩培…………………………………………………………………（2）§1-1实验室扩培…………………………………………………………………（2）    1培养基制备……………………………………………………………………（2）    2接种操作………………………………………………………………………（3）§1-2  生产现场扩培  ……………………………………………………………（5）    1准备工作……………………………………………………

2、…………………（5）    2汉生罐接种操作………………………………………………………………（5）    3扩大罐扩培……………………………………………………………………（5）    4二次（车间）扩大罐扩培……………………………………………………（6）第二章菌种保藏…………………………………………………………………（7）    1实验室菌种保藏与活化……………………………………………………（7）    2汉生罐菌种保藏与活化……………………………………………………（7）第三章酵母检测………………………………………………

3、…………………（8）§3-1  取  样……………………………………………………………………（8）    1扩培液、发酵液及待滤酒等的取样…………………………………………（8）    2酵母泥的取样…………………………………………………………………（8）§3-2  检  测…………………………………………………………………（10）    1酵母细胞形态检测……………………………………………………………（10）    2酵母细胞大小测定……………………………………………………………（10）    3酵母泥外观检测……………

4、…………………………………………………（11）    4酵母细胞数和出芽率的测定（血球计数板法）……………………………（11）    5酵母死亡率的测定（血球计数板法）…………………………………………（12）    6酵母肝糖染色法……………………………………………………………（13）    7酵母凝聚性的测定…………………………………………………………（14）    8酵母死灭温度的测定……………………………………………………………（15）    9酵母发酵失重实验……………………………………………………………（16）

5、    10酵母的呼吸缺陷型检测………………………………………………………（16）第一章  酵母扩培§1-1  实验室扩培1培养基制备【试剂】：冷麦汁、蒸馏水、新鲜鸡蛋。【器具】：试管（15×150）及（18×180）、小巴氏瓶（三角瓶）、大巴氏瓶（大三角瓶）、卡氏罐、中速滤纸、电炉、量筒、不锈钢锅、糖度计等。【仪器】：杀菌锅、天平（精度0.1g）。【方法】〖试管、三角瓶及巴氏瓶培养基的制备〗①        取样：取糖化冷却麦汁，视麦汁浊度情况判定是否进行过滤。2℃，按每0.5~1L使用一个鸡蛋的比例，加入打成泡沫的蛋

6、清，在不断地搅拌下保温30min；然后升温煮沸30min；将煮沸后的麦汁用水浴冷至80~90℃，用双层中速滤纸过滤。±②        澄清：将麦汁加热至450.2°P。±③        调糖：将过滤后的麦汁用蒸馏水调整糖度为11④        分装：试管（15×150）5mL，试管（18×180）10mL，分装小巴氏瓶（三角瓶）、大巴氏瓶（大三角瓶）。⑤        灭菌：分装后包扎好，115℃杀菌20min；杀菌后培养基放置2~3天，确定无菌后备用。        〖卡氏罐培养基的制备〗  取糖化冷却麦汁（有条

7、件的可取薄板前热麦汁）加入卡氏罐，然后封闭卡氏罐取样口，各呼吸阀等接口处均应以棉塞或呼吸阀进行封闭后包扎结实，115℃杀菌30~40min，于室温冷却至17~18℃；接种前以3L/min的速率充纯氧2~3min（卡氏罐有效容积20L）。2接种操作【器具】：酒精灯、酒精棉、剪刀、接种针、镊子、定量移液器或吸管等。【仪器】：超净工作台等。【方法】无菌室使用前，使用紫外线灯照射20~30分钟进行杀菌；进入无菌室换无菌工作服；所有操作采用无菌操作。〖活化〗①        操作前将冷冻管菌种置于室温下，使之内部培养基达到室温后，

8、振荡均匀；无菌操作，将冷冻管内的培养液全部转入盛有5mL培养基的试管中，于25±1℃培养72±2小时。②        将试管中的培养液轻轻振荡均匀，用接种环接取三环加入另一支盛有5mL培养基的试管中，于25±1℃培养24~36小时。③        将培养结束的试管培养液轻轻振荡均匀，用无菌吸管接0.1mL加入盛有