protein a亲和介质说明书

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1、NationalEngineeringResearchCenterforBiotechnology(Beijing)ProteinA亲和介质（ProteinAQZT4FF）产品说明书1.产品简介ProteinA能特异性地与抗体的Fc区结合，所以ProteinA亲和介质可用于抗体（单抗和多抗）的分离纯化，经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。ProteinAQZT4FF亲和介质以自制的琼脂糖凝胶为基质，以重组ProteinA为配基，具有很高的物理化学稳定性，配基不易脱落，寿命长，使用方便，应用广泛。2.产品特性参数

2、指标基质4%交联琼脂糖凝胶配基r-ProteinA形状球形介质平均粒径90μm(45-165)配基密度6mgProteinA/mlwetgel动态载量45-50mgh-IgG/mlwetgel最高流速（25℃）450cm/h推荐流速<150cm/h最高耐压0.3MPa(3bar)pH稳定性3~10（长时间）；2~11（短时间）保存4~8oC（20%乙醇）3.使用方法ProteinAQZT4FF广泛用于各种抗体的分离纯化。层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。平衡：用5~10CV的平衡缓冲液（20mMPB+0.15MNaCl

3、，pH7.0，添加适当浓度的NaCl抑制非特异性吸附）平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。　　进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液Add：No.1Beiertiao,Zhongguancun,HaidianDistrict,Beijing,ChinaTel/Fax：010-82544957Postcode：100190Web：www.nercb.com.cnE-mail：nercb@home.ipe.ac.cnNationalEngineeringResearchCenterforBiotechnology

4、(Beijing)溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45μm）处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。　　淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。洗脱：用洗脱缓冲液（20mM柠檬酸，pH3.0-4.0；或0.1M甘氨酸，pH3.0；或20mM乙酸钠，pH3.0-4.0；具体洗脱条件与抗体的结合强度和稳定性密切相关，效果不好时应进行洗脱缓冲液（种类和pH或添加剂）的优化）洗脱，收集流出液。洗脱后，应立刻用碱性缓冲液（如1MTris/HCl,pH9.

5、0）将收集到的抗体溶液中和到抗体稳定的pH，避免抗体失活，维持抗体的生物活性。　　再生、原位清洗：介质使用数次（5-10次，具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行再生、在位清洗。（1）用0.1M的乙酸或0.1M的乙酸/20%乙醇淋洗柱子3-5CV，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用；（2）也可用0.05MNaOH+1MNaCl或6M盐酸胍淋洗柱子3-5CV，并用3~10CV的纯水冲洗，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用。　　其它注意事项：在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。4.具体应用1载量分析：利用人免

6、疫球蛋白（血浆来源，纯度95%，3mg/ml）进行载量分析（柱体积2ml；BufferA：20mMPB+0.15MNaCl，pH7.0，BufferB：0.1M甘氨酸，pH3.0；流速：0.5ml/min；上样量：40ml），层析谱图如图1（A：进口介质；B：本中心介质）所示，结果表明两种介质的层析谱图（穿透行为、洗脱峰）基本一致，无明显差异。洗脱峰的蛋白浓度分析结果表明，二者的载量相似，均在40-45mgh-IgG/ml介质之间。2纯化效果分析：利用小鼠腹水（BufferA稀释4倍）上样进行亲和层析，考察介质的分离纯化效果（柱体积2ml；B

7、ufferA：20mMPB+0.15MNaCl，pH7.0，BufferB：20mM柠檬酸，pH3.0；流速：0.5ml/min；上样量：4ml），层析谱图如图2所示，纯度分析结果表明，经过一步亲和层析，即可得到纯度95%以上的IgG。Add：No.1Beiertiao,Zhongguancun,HaidianDistrict,Beijing,ChinaTel/Fax：010-82544957Postcode：100190Web：www.nercb.com.cnE-mail：nercb@home.ipe.ac.cnNationalEngine

8、eringResearchCenterforBiotechnology(Beijing)图1h-IgG在ProteinA介质上的动态穿透曲线（A：对照介质；B：本中