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《gb 4789.4-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华人民共和国国家标准GB4789.4—2016食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布国家食品药品监督管理总局GB4789.4—2016前言本标准代替GB4789.4—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》、SN0170—1992《出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法》、SN/T2552.5—2010《乳及乳制品卫生微生物学检验方法第5部分:沙门氏菌检验》。整合后的标准与GB4789.4—2010相比,主要变
2、化如下:———修改了检测流程和血清学检测操作程序;———修改了附录A和附录B。ⅠGB4789.4—2016食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验1范围本标准规定了食品中沙门氏菌(Salmonella)的检验方法。本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:2.1冰箱:2℃~5℃。2.2恒温培养箱:36℃±1℃,42℃±1℃。2.3均质器。2.4振荡器。2.5电子天平:感量0.1g。2.6无菌锥形瓶:容量500mL,250mL。2.7无菌吸管:1mL(具0.01mL刻
3、度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。2.8无菌培养皿:直径60mm,90mm。2.9无菌试管:3mm×50mm、10mm×75mm。2.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。2.11全自动微生物生化鉴定系统。2.12无菌毛细管。3培养基和试剂3.1缓冲蛋白胨水(BPW):见A.1。3.2四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液:见A.2。3.3亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液:见A.3。3.4亚硫酸铋(BS)琼脂:见A.4。3.5HE琼脂:见A.5。3.6木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂:见A.6。3.7沙门氏菌属显色培养基
4、。3.8三糖铁(TSI)琼脂:见A.7。3.9蛋白胨水、靛基质试剂:见A.8。3.10尿素琼脂(pH7.2):见A.9。3.11氰化钾(KCN)培养基:见A.10。3.12赖氨酸脱羧酶试验培养基:见A.11。3.13糖发酵管:见A.12。3.14邻硝基酚β-D半乳糖苷(ONPG)培养基:见A.13。3.15半固体琼脂:见A.14。1GB4789.4—20163.16丙二酸钠培养基:见A.15。3.17沙门氏菌O、H和Vi诊断血清。3.18生化鉴定试剂盒。4检验程序沙门氏菌检验程序见图1。图1沙门氏菌检验程序2GB4789.4—2
5、0165操作步骤5.1预增菌无菌操作称取25g(mL)样品,置于盛有225mLBPW的无菌均质杯或合适容器内,以8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min。若样品为液态,不需要均质,振荡混匀。如需调整pH,用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶或其他合适容器内(如均质杯本身具有无孔盖,可不转移样品),如使用均质袋,可直接进行培养,于36℃±1℃培养8h~18h。如为冷冻产品,
6、应在45℃以下不超过15min,或2℃~5℃不超过18h解冻。5.2增菌轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1mL,转种于10mLTTB内,于42℃±1℃培养18h~24h。同时,另取1mL,转种于10mLSC内,于36℃±1℃培养18h~24h。5.3分离分别用直径3mm的接种环取增菌液1环,划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板(或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板),于36℃±1℃分别培养40h~48h(BS琼脂平板)或18h~24h(XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板),观察各个平板上生长的菌
7、落,各个平板上的菌落特征见表1。表1沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板沙门氏菌菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色,菌落周围培养基可呈黑色或棕色;有些菌株形成灰绿BS琼脂色的菌落,周围培养基不变HE琼脂蓝绿色或蓝色,多数菌落中心黑色或几乎全黑色;有些菌株为黄色,中心黑色或几乎全黑色菌落呈粉红色,带或不带黑色中心,有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心,或呈现全部黑色XLD琼脂的菌落;有些菌株为黄色菌落,带或不带黑色中心沙门氏菌属显色培按照显色培养基的说明进行判定养基5.4生化试验5.4.1自选择性琼脂平板上分别挑
8、取2个以上典型或可疑菌落,接种三糖铁琼脂,先在斜面划线,再于底层穿刺;接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板,于36℃±1℃培养18h~24h,必要时可延长至48h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内,沙门氏菌属的反应结果见表2。3GB
