GB4789.4-2010 食品微生物学检验 沙门氏菌检验.pdf

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.4—2010食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination:Salmonella2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布GB4789.4—2010前言本标准代替GB/T4789.4-2008《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》。本标准与GB/T4789.4-2008相比,主要变化如下:——修改了标准的中英文名称;——修改了

2、标准的范围;——修改了培养基和试剂;——修改了设备和材料;——修改了附录A。本标准的附录A、附录B为规范性附录。本标准所代替的历次版本发布情况为:——GB4789.4-84、GB4789.4-1994、GB/T4789.4-2003、GB/T4789.4-2008。IGB4789.4—2010食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验1范围本标准规定了食品中沙门氏菌(Salmonella)的检验方法。本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料

3、如下:2.1冰箱:2℃~5℃。2.2恒温培养箱:36℃±1℃,42℃±1℃。2.3均质器。2.4振荡器。2.5电子天平:感量0.1g。2.6无菌锥形瓶:容量500mL,250mL。2.7无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。2.8无菌培养皿:直径90mm。2.9无菌试管:3mm×50mm、10mm×75mm。2.10无菌毛细管。2.11pH计或pH比色管或精密pH试纸。2.12全自动微生物生化鉴定系统。3培养基和试剂3.1缓冲蛋白胨水(BPW):见

4、附录A中A.1。3.2四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液:见附录A中A.2。3.3亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液:见附录A中A.3。3.4亚硫酸铋(BS)琼脂:见附录A中A.4。3.5HE琼脂:见附录A中A.5。3.6木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂:见附录A中A.6。1GB4789.4—20103.7沙门氏菌属显色培养基。3.8三糖铁(TSI)琼脂:见附录A中A.7。3.9蛋白胨水、靛基质试剂:见附录A中A.8。3.10尿素琼脂(pH7.2):见附录A中A.9。3.11氰化钾(KCN)培养基:见附录A

5、中A.10。3.12赖氨酸脱羧酶试验培养基:见附录A中A.11。3.13糖发酵管:见附录A中A.12。3.14邻硝基酚β-D半乳糖苷(ONPG)培养基:见附录A中A.13。3.15半固体琼脂:见附录A中A.14。3.16丙二酸钠培养基:见附录A中A.15。3.17沙门氏菌O和H诊断血清。3.18生化鉴定试剂盒。2GB4789.4—20104检验程序沙门氏菌检验程序见图1。检样25g(mL)样品+225mLBPW36℃±1℃,8h~18h1mL+TTB10mL1mL+SC10mL42℃±1℃,18h

6、~24h36℃±1℃,18h~24hBSXLD(或HE、显色培养基)36℃±1℃,40h~48h36℃±1℃,18h~24h挑取可疑菌落TSI,赖氨酸,NA,靛基质,尿素(pH7.2),KCN生化鉴定试剂盒或全H2S+靛基质-H2S+靛基质+H2S-靛基质-尿反应结果与左自动微生物生化鉴定尿素-KCN-尿素-KCN-素-KCN-侧描述不符系统+赖氨酸+赖氨酸+赖氨酸+/-甘露醇+、山梨醇+ONPG-沙门氏菌,血清学试验非沙门氏菌报告图1沙门氏菌检验程序5操作步骤5.1前增菌称取25g(mL)样品放

7、入盛有225mLBPW的无菌均质杯中,以8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min。若样品为液态,不需要均质,振荡混匀。如需测定pH值,用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。3GB4789.4—2010无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中,如使用均质袋,可直接进行培养,于36℃±1℃培养8h~18h。如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min,或2℃~5℃不超过18h解冻。5

8、.2增菌轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1mL,转种于10mLTTB内,于42℃±1℃培养18h~24h。同时,另取1mL,转种于10mLSC内,于36℃±1℃培养18h~24h。5.3分离分别用接种环取增菌液1环,划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板(或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板)。于36℃±1℃分别培养18h~24h(XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板)或40h~48h(BS琼脂平板),观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表

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