半夏愈伤组织诱导优化探究

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1、半夏愈伤组织诱导优化探究　　摘要：为快速诱导形成适合悬浮培养的半夏愈伤组织，对半夏愈伤诱导培养基采取了优化组合。在MS+1.0mg·L-16-BA+2.0mg·L-1NAA培养基上能诱导形成浓绿、致密的愈伤组织；在MS+0.5mg·L-16-BA+2.0mg·L-12，4-D的培养基上，可诱导形成疏松的黄白色愈伤组织，但生长缓慢。将前者后期继代培养基配方调整为MS+0.5mg·L-16-BA+2.0mg·L-12，4-D，可较快诱导出疏松的黄白色愈伤组织，适合做悬浮培养。关键词：半夏；愈伤组织；诱导；培养基中图分类号：S567.2

2、文献标识码：ADOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.09.002OptimizationStudyofCallusInductiononPinelliaternataCHENGXia-ying，YANGZong-qi（CollegeofLifeSciences，ZhejiangSci-TechUniversity，Hangzhou，Zhejiang310018，China）Abstract：InordertoquicklyinducecallusofPinelliaternataBreitsuit

3、ableforsuspensionculture，theoptimumcombinationofmediumwastaken.Thedarkgreenanddensecalluswereinduced6onMS+1.0mg·L-16-BA+2.0mg·L-1NAA；andyellowandwhitecalluswereinducedonMS+0.5mg·L-16-BA+2.0mg·L-12，4-D，butthecallusgrewslowly.Suitablecalluscouldbegotwhenthemediuminthela

4、teoftheformerwereadjustedforMS+0.5mg·L-16-BA+2.0mg·L-12，4-D，andcouldbesuspendedinliquidmediumafter3～5timesofsubculture.Keywords：Pinelliaternata；callus；induction；cultivationmedium三叶半夏Pinelliaternata（Thunb.）Breit.（又名半夏）为天南星科Araceae半夏属Pinellia多年生小草本，株高15～30cm，块茎近球形，叶出自块茎

5、顶端，叶柄长6～23cm，主产四川、湖北、河南、贵州、安徽等地。半夏是一种重要的药用植物，其块茎可入药[1-2]。据统计，在558种中药处方中，半夏的使用频率处第22位。半夏性温，味辛，有毒，传统药理作用为燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结，主要用于痰多咳喘，头痛眩晕，呕吐反胃，梅核气症等。进一步研究发现，半夏还具有抗肿瘤、抗生育、降血脂、护肝和治疗冠心病等多种重要的作用[3]。本试验对半夏愈伤组织的诱导进行进一步探究，通过调整继代过程中培养基配方，优化培养方案，提高了适合悬浮培养的愈伤组织培养效率，为半夏悬浮培养药物产业化生产提供理论

6、依据。61材料和方法1.1试验材料半夏块茎采自河北省易县（三叶半夏）。1.2试验方法1.2.1外植体的获得及处理选取直径为1.0cm左右的的块茎用清水洗净，在温度为28℃、相对湿度为80%条件下用湿沙催芽，待叶片长至3～4cm时，取叶片及叶柄用0.1%升汞灭菌15min，无菌水冲洗5次。叶片和叶炳分别切片和切段接种在不同激素配比的培养基上，放置于25℃、光照1500lx，10～12h·d-1条件下进行培养。1.2.2诱导半夏愈伤组织的培养基设计方案在MS培养基中添加不同激素浓度及组合（包括6-BA、2，4-D和6-BA、NAA），

7、制成不同浓度梯度的激素培养基配方，如表1和表2所示。1.2.3愈伤继代[4-5]选取生长状况良好的愈伤组织进行继代培养，每15d继代一次。1.2.4半夏愈伤组织继代过程中培养基的调整用以上2种激素组合的MS培养基进行愈伤组织的诱导，并经过2次继代后观察发现，用6-BA、2，4-D诱导的愈伤组织疏松、黄白色，但生长缓慢，且死亡率相对较高；用6-BA、NAA6诱导的愈伤组织生长快，几乎无死亡现象，但是愈伤组织坚实，呈绿色，易形成丛生芽。将部分用6-BA、NAA诱导的愈伤组织经2次继代后，转到6-BA、2，4-D激素的培养基上（选择对愈

8、伤诱导最佳的6-BA和2，4-D激素组合配方）继代，观察记录试验结果。2结果与分析2.1不同外植体形成愈伤组织的差别将半夏外植体叶片和叶柄分别接入上述培养基中培养，2周后叶柄开始膨大，形成明显的愈伤组织，但叶片变化不明显。1个月后叶片和叶柄均可形成