蚕豆病讲解学习.ppt

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1、蚕豆病恶心、呕吐、面色苍白皮肤及巩膜黄染红细胞1.98×1012/L血红蛋白53g/L血清总胆红素85.5µmol/L尿蛋白（++）尿胆红素(－)尿胆素原(+)尿液镜下未见红细胞黄疸红细胞膜不完整，已破裂红细胞含量少含量明显增加血红蛋白量减少排尿呈酱油样色游离胆红素增加溶血性黄疸蚕豆病肠肝循环增多蚕豆病简介蚕豆病是一种6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G-6-PD）缺乏所导致的疾病，表现为在遗传性葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）缺陷的情况下，食用新鲜蚕豆后突然发生的急性血管内溶血。易发人群多见于儿童，男性患者约占90%以上。临床表现早期有恶寒、微热、头

2、昏、倦怠无力、食欲缺乏、腹痛，继之出现黄疸、贫血、血红蛋白尿，尿呈酱油色，此后体温升高，倦怠乏力加重，可持续3日左右。与溶血性贫血出现的同时，出现呕吐、腹泻和腹痛加剧，肝脏肿大，肝功能异常，约50%患者脾大。严重病例可见昏迷、惊厥和急性肾衰竭，若急救不及时常于1～2日内死亡。二、设计实验进一步明确诊断红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定（紫外法）（一）实验器材和试剂1.实验器材恒温水循环紫外分光光度计，可见分光光度计，离心机。2.试剂（1）0.5mol/LTris-HClMgCl2缓冲溶液（pH8.0）：称取Tris12.1g,MgCl2·6H2

3、O4.06g,加入160mL蒸馏水溶解，用HCl调pH至8.0，然后加入蒸馏水至200mL。（2）2mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP＋)：称取NADP＋21.3mg，溶于10mL蒸馏水中。4℃可保存20天左右。（3）6mmol/L葡萄糖—6—磷酸二钠(G6P－Na2)：称取21.5mgG6P－Na2·2H2O，溶于10mL蒸馏水中。4℃可保存20天左右。（4）溶血剂：取巯基乙醇0.1mL，10%EDTA2.0mL，6mmol/LNADP＋0.4mL，加蒸馏水至总体积200mL。（5）血红蛋白氧化剂（Drabkin试剂）：称取K3Fe

4、(CN)60.2g，KCN0.052g，NaHCO31.0g，加蒸馏水至1000mL，置棕色瓶内避光保存，可保存20天。（6）0.9%NaCl，ACD抗凝剂。（二）实验操作流程1、洗涤红细胞取静脉血2.0mL，放入含0.4mLACD抗凝剂的试管中，混匀。吸取0.2mL抗凝血放入试管中，加入4mL预冷的生理盐水，轻轻摇匀，2500r/min离心5min,倾去上清，重复三次。2、溶血液的制备向红细胞沉淀中加入溶血剂2.0mL，震荡1min，4℃放置10min以上。3、NADPH的测定取石英比色杯两只，标为“测定”及“空白”，按下表操作：试剂体积蒸馏水

5、（uL）0.5mol/LTris-HClMgCl2缓冲溶液（uL）6mmol/LG6P-Na2(uL)2mmol/LNADP+(uL)2040300300300混匀后放入带恒温水循环（25℃）的紫外分光光度计中，预热10min然后在“测定”中加入溶血液60uL,“空白”中加入溶血剂60uL，混匀以“空白”调“0”,1min后开始测340nm吸光度（A340），每2min纪录吸光度一次，至10min止，比较每2minA值的变化情况，若相近则表明酶促反应平稳。以10minA值的变化（△A340）计算NADPH的产量。4.溶血液中血红蛋白含量的测定取试

6、管一支，按下表操作：试剂体积Drabkin(mL)溶血液(mL)0.33.0混匀，室温放置15min，以Drabkin试剂调零，读取540nm的吸光度（A540）。（三）注意事项1.洗涤红细胞时禁止剧烈震荡，避免溶血。2.测定NADPH时读取吸光度的时间要准确。（四）结果分析1.NADPH产量的计算NADPH在340nm处，其每微摩尔的吸光系数（ε）为6.220，故10min内NADPH的产量计算公式为：NADPH产量（μmol）=2.血红蛋白含量的计算血红蛋白氧化为高铁血红蛋白以后，在540nm处，其毫摩尔吸光细数（ε）为44，故溶血液中血红蛋

7、白的含量计算公式为：血红蛋白含量（mmol）=3.G6PD比活性（U/gHb）的计算G6PD比活性单位（U/gHb）==【参考范围】正常值：大于2.8U/gHb三、从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果红细胞膜的破坏胆色素代谢异常红细胞膜的破坏葡萄糖磷酸戊糖途径葡萄糖6–磷酸葡萄糖5–磷酸核糖NADPH+H+磷酸化5–磷酸核糖磷酸戊糖途径NADPH+H+5–磷酸核糖NADPH+H+5–磷酸核糖NADPH+H+5–磷酸核糖NADPH+H+NADPH维持GSH(谷胱甘肽）的正常含量和还原状态G6PD(6–磷酸葡萄糖脱氢酶）起关键作用还原型谷胱甘

8、肽体内重要的抗氧化剂保护红细胞膜蛋白的完整性红细胞膜的破坏单核吞噬细胞识别吞噬血红蛋白珠蛋白氧化破坏红细胞氧化破坏红细胞单核吞噬细胞识别