生物技术实验题目.doc

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1、1.高效液相色谱主要用于混合物进行分离，并对分离物进行定性、定量分析，根据高效液相色谱的分离原理，常将液相色谱分为吸附色谱、分配色谱、离子色谱、亲和色谱四种类型。2.影响电泳分离的主要因素是：待分离生物大分子的性质、缓冲液的性质、电场强度、温度、电渗、支持介质。3.液相色谱系统主要用于生物样品的分离纯化，并对分离物进行定性定量分析检测。1.分级沉淀从溶液中分步沉淀而分离物质的方法。可以用改变溶液的离子强度、pH或介电常数等,使溶液中不同的物质按溶解度变化的顺序逐步沉淀出来。常用于大分子物质的分离。如逐步增加沉淀剂（如硫酸铉）的饱和度而使不同类型的蛋白质分

2、步沉淀。2.差速离心法该方法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法。此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。3.电泳加样缓冲液就是实验室常说的loadingbuffer,主要成分是漠酚蓝染料和甘汕（实验时是由第五小组配制）。前者用于控制电泳过程，后者增大溶液密度使得加样时样品溶液可以沉入样品凹槽底部。4.梯度混合在柱层洗脱液配制成PAGE分离胶配制时使用，是根据分离样品的性质选择在一•定范围内变化的PH或离子浓度。5.透析通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯

3、化技术。6、层析洗脱曲线在层析过程中以流出液中某离子浓度为纵坐标，洗脱液体积为横坐标作图，得到洗脱曲线。7.超滤超滤是以压力为推动力的膜分离技术之一。以大分子与小分子分离为目的，膜孔径在20-1000A之间。1.蛋白质盐溶盐析的原理是什么？影响盐析的因素有哪些？【盐溶】在蛋白质水溶液中，加入少量的中性盐［即稀浓度］,如硫酸铉、硫酸钠、氯化钠等，会增加蛋白质分子表面的电荷，增强蛋白质分子与水分子的作用，从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大。这种现象称为盐溶。【盐析】向蛋白质溶液中假如高浓度的中性盐,以破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白质的溶解度降低而从溶液中析出的

4、现象，叫做盐析。影响盐析的因素有：（1）温度：（2）pH值：（3）蛋白质浓度：4）离子强度和类型。2.阳离子树脂一般分为哪两类？有什么区别？答：（1）强酸性阳离子树脂含有大量的强酸性基团，如横酸基一SO3H,容易在溶液中离解出H+,故呈强酸性。树脂离解后，本体所含的负电基团，如SO3-,能吸附结合溶液中的其他阳离子。这两个反应使树脂中的H+与溶液中的阳离子互相交换。（2）弱酸性阳离子树脂这类树脂（IONRESIN）含弱酸性基团，如段基一COOH,能在水中离解出H+而呈酸性。色可赛思树脂离解后余卜的负电基团，如R-COO-（R为碳氢基团），能与溶液中的其他

5、阳离子吸附结合，从而产生阳离子交换作用。这种树脂的酸性即离解性较弱，在低pH下难以离解和进行离子交换，只能在碱性、中性或微酸性溶液中（如pH5〜14）起作用。3、细胞破碎常采用哪些方法？不同的生物体或同一生物体的不同部位的组织，其细胞破碎的难易不一，使用的方法也不同。细胞破碎的方法主要有机械法、物理法和生物化学方法。机械法：是指通过机械切力是组织细胞破碎的方法，主要有：（1）研磨（2）组织捣碎嘴。物理法：是指通过各种物理因素使组织细胞破碎的方法，在生化制备中的方法有：（1）反复冻融法（2）超声波处理法（3）高压匀浆法（4）冷热交替法。生物化学方法：（1）

6、自溶法（2）溶胀法（3）酶解法（4）有机溶剂处理法。解答：就结合能力而言：尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480-600?g/cm2,可结合短至10bp的核酸片段；硝酸纤维素膜结合DNA和RNA能力可达80-100?g/cm2,对于200bp的核酸片段结合能力不强；PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125—300?g/cm2。硝酸纤维素膜依靠疏水性相互作用结合DNA,结合不牢I古I；PVDF膜结合牢固，耐高温，特别适合于蛋白印迹。5.以下双波长检测样品层析过程的记录曲线，指出为什么要设计阶梯形洗脱曲线？打算要获得几个样品峰？阶梯形洗脱曲目的是为了获得不

7、同的洗脱浓度卜的蛋白峰，梯度越高洗脱能力越强。在本实验中需要洗脱的是五个不同梯度样品峰，最后一个是为了冲洗柱子，去除残留杂质。6.简述膜分离技术的特点物理变化；不发生相反应；选择性高；浓缩和纯化可一步完成；设备易放大，可分批或连续操作。7.离心机集体震动、响声异常，常见的原因有哪些？（3条以上即可（1）离心管重量不平衡，放置不对称；（2）转头孔内有异物，负荷不平衡或使用了不合格的试管套；（3）转轴上端固定螺帽松动，转轴摩擦或弯曲；（4）电机转子不再磁场中心会产生噪音；（5）转子本——身损伤等。8.如何理解设计分离纯化早期使用方法的选择依据与原则？答：选择

8、依据：分离纯化的早期，由于提取液中的成分复杂，目的物浓度较稀，与目的物理化性质相