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《环磷酰胺对小鼠免疫抑制的动物模型建立及其免疫功能的测定.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、环磷酰胺对小鼠免疫抑制的动物模型建立摘要:[目的]建立环磷酰胺对小鼠的免疫抑制的动物模型，从天然免疫功能和获得免疫功能两方面检测对小鼠的影响。[方法]初次免疫设立实验组给予OVA-AL(OH)3(0.5/只)和对照组给予NS（0.5/只）；8d,10d,12d,14d分别给实验组和对照组注射NS和CTX(100mg/kg);与15d加强免疫分别注射NS和OVA-AL(OH)3(0.5/只)；22d检测免疫功能[结果]与NS-NS组相比，CTX-NS组的SI值，双向免疫及ELISA的效价无明显差别，但吞噬细胞指数及吞噬细胞百分率明显降低；与NS-OVA相比C
2、TX-OVA组的SI明显降低，双向免疫剂ELISA效价都降低[结论]环磷酰胺对小鼠的T淋巴细胞，B淋巴细胞以及吞噬细胞有抑制作用Abstract:[aims]Toestablishanimalmodelofcyclophosphamideinmiceimmunosuppression,testinmicefromtwoaspectsofnaturalimmunefunctionandimmunityfunction[methods]PrimaryimmunetosetuptheexperimentalgroupgivenOVA-AL(OH)3andThec
3、ontrolgroupgivenNS;the8th,10th,12th,14thdaygivetheexperimentalgroupNSandthecontrolgroupCTX,andthe15thstrengthentheimmune;the22thtesttheimmunefunction[results]ComparedwithNS-NSgroup,theSIvalueofCTX-NSgroup,bidirectionalimmunepotencyandELISAhasnoobviousdifference,butthephagocyteinde
4、xandphagocytespercentagedecreasedobviously;ComparedwithNS-OVACTX-SIofOVAgroupwasobviouslylower,bidirectionalimmuneagentELISAtiterwerereduced[conclusion]CyclophosphamideinmiceofTlymphocyte,Blymphocyteandphagocyteshaveinhibition关键词：环磷酰胺CTX免疫抑制动物模型淋巴细胞建立一种环磷酰胺免疫抑制小鼠模型，并将其与正常小鼠进行对照，通过
5、检测小鼠的天然及获得免疫功能对比其改变与不同，从而可知环磷酰胺对免疫抑制的作用，有利于进一步进行对临床应用抗肿瘤的研究。1.材料与方法1.1材料1.11实验动物：ICR小鼠4只，雌性，20~22g，清洁级，吉林大学实验动物中心。1.12重要器材：显微镜，离心机，超净台，细胞计数板，细胞培养箱，酶标仪，打孔器，加样器（200μl,20μl），酶标板，EP管1.13实验试剂：CTX(山西普德药业公司)，生理盐水（NS），OVA+AL(OH)3，苦味酸，培养液（IMDM）5%FCS,ConA(10μg/ml),MTT(5μg/ml),白细胞计数液（2%冰醋酸），
6、二甲亚砜（DMSO）,1.5%琼脂，PBS，洗液（PBS-Tween20），封闭液BSA（0.5%~1%的牛血清白蛋白），酶标抗体（HRP-GaM）,显色底物，终止液，3%鸡红细胞悬浮液，3%淀粉溶液，Giemsa-wright’s染液1.2方法1.21小鼠模型的建立：初次免疫设立实验组给予OVA-AL(OH)3(0.5/只)和对照组给予NS（0.5/只）；8d,10d,12d,14d分别给实验组和对照组注射NS和CTX(100mg/kg);与15d加强免疫分别注射NS和OVA-AL(OH)3(0.5/只)；22d检测免疫功能1.22T淋巴细胞功能检测（M
7、TT法）实验动物摘眼球取血后无菌操作取脾脏和胸腺，制备单细胞悬液，进行细胞计数，调细胞浓度至1x107/ml,培养48小时，加入MTT，继续培养2小时，小心吸取上清，加入DMSO震荡是颗粒溶解，用酶标仪测定吸光度值A570nm，结果测量：用酶标仪测定光密度值A570nm（用空白孔调零），记录结果。结果判定：SI(刺激指数)=ConA刺激孔A值/对照组A值1.23B淋巴细胞功能检测双向免疫扩散法：实验动物摘眼球取血，分离血清。制备琼脂糖凝胶后进行铺胶，待琼脂糖凝固后与载玻片上打梅花孔。将血清倍比稀释，稀释度为1:2,1:4,1:8,1:16.与梅花孔中央加入
8、Ag（OVA0.1mg/ml）,周围的孔依次按顺序加入生理盐水，1
