细菌、霉菌与酵母菌计数方法,大肠杆菌检测.doc

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1、1、称取供试品10g，置0.9%无菌氯化钠溶液100ml中，用超声仪器使其充分混匀，作为供试液。2、取均匀供试液，进一步稀释成1：10、1：102、1：103等适宜的稀释级。分别取供试液和连续三级稀释的供试液各1ml，置平皿中。每稀释级和阴性对照各作3个平皿，3、灭菌后的培养基45~50℃水浴加热，待其融化后，倾倒约15ml于已加入供试液的平皿中，混匀，待凝固后，倒置培养。4、倒置培养箱中培养48小时，分别再24小时及48小时点计菌落数，一般以48小时菌落数为准。菌数报告规则细菌选取平均菌落数再30~300之间的稀释级，霉菌选取平均菌落数在30~100之间的稀释级作为报告均属

2、计算的依据。如有一个稀释级别在30~300（30~100）之间时，将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告；如果同时有2各稀释级在30~300（30~100）之间时，按下式计算两级比值。比值=当比值≤2时，以两稀释级的均值报告，当比值＞2时，以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告；如同时有3各稀释级的平均菌落数均在30~300之间时，以后2各稀释级计算级间比值报告；如各稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在300（100）以上，按最高稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各细菌数每1g不得过1000cfu。每1ml不得过100cfu。霉菌和酵母菌数每1g或1ml

3、不得过100cfu。大肠埃希菌每1g或1ml不得检出。0.9%无菌氯化钠溶液取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，过滤，分装、灭菌。1、取胆盐乳糖培养基3份，每份100ml，2份分别加入规定量的供试液，其中1份加入对照菌50~100个作阳性对照，第三份加入与供试液等量的稀释液作阴性对照。培养18~24小时.阴性对照应无菌生长。2、取上述3份的培养物各0.2ml，分别接种至5mlMUG培养基管内培养，分别于5小时与24小时时，取未接种的MUG培养基管作本底对照，将各管置365nm-紫外光下观察。阳性对照管呈现荧光，MUG阳性。供试液的MUG呈现荧光，MUG阳性；无荧光，M

4、UG阴性。3、然后加数滴靛基质试液与MUG管内，页面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色为阴性。