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时间:2017-12-28
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1、植物活性多糖的提取方法有多种,在水提醇沉的基础上,常采用酶解、微波、超声波,膜处理和CO<2>超临界萃取等方法进行辅助提取或精制.最常用的还是水提醇沉法.举例:蒽酮比色法,具体步骤一、仪器、试剂和材料1.仪器:电子天平,超声波清洗器,电热恒温水浴锅,抽滤设备,分光光度计,容量瓶,刻度吸管等2.试剂:(1)葡萄糖标准液:l00µg/mL(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂:0.2g蒽酮溶于100mL浓H2SO4中。当日配制使用。3.材料:甜高粱,甘草二.操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管,按下表数据配制
2、一系列不同浓度的葡萄糖溶液:管号1234567葡萄糖标准液(mL)00.10.20.30.40.60.8蒸馏水(mL)10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量(µg)0102030406080在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖,以防蒸发。自水浴沸腾起计时,准确煮沸l0min,取出,用冰浴冷却至室温,在620nm波长下以第一管为空白,迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量(µg)为横坐标,以吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。2.植物样品
3、中可溶性糖的提取:将样品粉碎,105ºC烘干至恒重,精确称取1~5g,置于50mL三角瓶中,加沸水25mL,加盖,超声提取10min,冷却后过滤(抽滤),残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤(抽滤),滤液收集在50mL容量瓶中,定容至刻度,得可溶性糖的提取液。3.稀释:吸取提取液2mL,置于另一50mL容量瓶中,以蒸馏水定容,摇匀。4.测定:吸取1mL已稀释的提取液于试管中,加入4.0mL蒽酮试剂,平行三份;空白管以等量蒸馏水替代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量(
4、µg)。三、结果处理:C×V总×D样品含糖量(%)=—————————————×100%W×V测×106其中:C——在标准曲线上查出的糖含量(µg),V总——提取液总体积(mL),V测——测定时取用体积(mL),D——稀释倍数,W——样品重量(g),106——样品重量单位由g换算成µg的倍数
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