磁珠偶联抗原方法

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1、磁珠偶联抗原活化移取0.5mL(10mg)的BioMagPlus羧基磁珠至15mL尖头离心管内，并放置在磁分离架上直到上清液变完全透彻后，用吸管小心移弃上清。加5mLofMES缓冲液充分混匀洗涤.将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。重复Step2,三次.最后一次洗涤后,重悬磁珠于5mL的MES缓冲液中。活化试剂（），剧烈振荡摇匀。室温下，将离心管置于旋转混匀仪上活化反应30分钟。反应过程中，注意不让磁珠沉淀聚积在一起。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。重复

2、Step2,四次。蛋白偶联计算需要偶联的蛋白，抗体量.一般地，每mg活化的羧基磁珠可以偶联20-500ug的蛋白（抗体）。可适量添加一些载体蛋白，如BSAFractionV，增加反应体系中的总蛋白量，从而可以起到一定的封闭作用。保证抗体偶联的正确方向。将蛋白加至5mLMES缓冲液中。（吸取50μL蛋白液于950μL的MES缓冲中.配成1：20的稀释液.标记为偶联反应前蛋白液.置于一旁用于后面的偶联率计算。）将剩下的蛋白液加到装有活化磁珠的离心管内，剧烈振荡混匀，室温下，将离心管置于旋转混匀仪上偶联反应16

3、-24小时。（将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心收集上清.标记为偶联后蛋白液，用于计算偶联率。）重悬磁珠于5mLMES缓冲液中，振荡摇匀。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。重复Step6,一次加5mL的淬灭液，振荡摇匀，室温下，将离心管置于旋转混匀仪上30分钟。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。洗涤和贮存偶联后的磁珠加5mL洗涤缓冲液并剧烈振荡摇匀。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。重复Step1,三次。最后一次

4、洗涤后,重悬磁珠于2mL洗涤缓冲液内，此时磁珠的浓度约为5mg/mL.置于2-8摄氏度保存。0.05MMES配方：2-（N-吗啉代）乙磺酸，用超纯水配制即可