血红蛋白的提取与分离模板ppt课件.ppt

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1、课题3血红蛋白的提取和分离课题背景2003年4月14日宣布人类基因组序列图完成这标志着进入了后基因组和蛋白质组时代；人类基因组：指DNA分子所携带的全部遗传信息蛋白质组：生物个体表达的蛋白质分子的总和。主要是对蛋白质功能的研究基础知识血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2和CO2的运输。1、分离生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子2、蛋白质分离和提取的原理根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质

2、(二）蛋白质的提取3、高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？变性、变性、空间结构4、人们用鸡的红细胞提取DNA，用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取，人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白（三）凝胶色谱法1、别名：分配色谱法2、概念：根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离②实例：葡聚糖、琼脂糖3、凝胶①性质：一些微小多孔的球体，内含许多贯穿的通道①大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔

3、小球体，内部有许多贯穿的通道4、凝胶色谱法的原理—分子筛效应③分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离②当不同的蛋白质通过凝胶时，分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢例1利用凝胶色谱法，什么样的蛋白质先洗脱出来A.相对分子质量大的B.溶解度高的C.相对分子量小的D.所代电荷多的2.凝胶色谱法分离蛋白质的依据是A.对其他分子的亲和力B.溶解度C.所带电荷多少D.相对分子质量的大小（四）缓冲溶液1、概念在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀

4、释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。能够抵制外界的酸或碱的对溶液的PH值的影响，维持PH基本不变2、作用3、缓冲溶液的配制通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液②弱碱和弱碱盐NH4OHNH4CL③多元弱酸的酸式盐和其他所对应的次级盐NaH2PO4Na2HPO4KH2PO4K2HPO4①弱酸和弱酸盐组合H2CO3NaHCO3CH3COOHCH3COONa思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞

5、内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色)和科学研究(活性)（五）电泳：1、概念带电粒子在电场作用下发生迁移的过程2、原理①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。②电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离3、类型琼脂糖凝胶电泳和聚丙稀酰胺凝胶电泳4、实例由单体丙烯酰胺和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺在引发剂和催化剂的作用下聚合交联成

6、三维网状结构的凝胶十二烷基磺酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量①应用②聚丙稀酰胺凝胶蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素③原理④SDS作用为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入SDSSDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是单条肽链的分子量。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种电荷间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。⑤SDS作用机理讨论：如何

7、测定蛋白质的分子量？使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分子量时，可选用一组已知分子量的标准蛋白同时进行电泳，根据已知分子量的标准蛋白的电泳区带位置，用电泳迁移率和分子量的对数作标准曲线，可以测定未知蛋白质的分子量。市场上有高分子量、次高分子量及低分子量的标准蛋白试剂出售例题1：（2005深圳一模）细菌蛋白质在极端环境条件下可通过肽链之间的二硫键维持稳定。已知不同的多肽产物可因分子量不同而以电泳方式分离。下列左图是一个分析细菌蛋白的电脉结果图，“-”代表没加还原剂，“+”代表加有还原剂，还原剂可打断二硫键，“M”代表已知分子量的蛋白质。右侧数字代表蛋白

8、质或多肽的相对分子量。根据左侧结果，右列哪个图案最能