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时间:2020-09-03
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1、放线菌的分离(1)注意土样在用之前要风干处理20天以上,以除去大部分的细菌。(2)注意在培养基中添加重铬酸钾适量(1)取体积为300ml的高氏一号培养基,加入0.1%的重铬酸钾15mL,使之终浓度为50ppm,摇匀,倒平板,待用。(2)取土样5g,摊平于大号培养皿上,在恒温干燥箱中120℃干热处理1h。(3)土样热处理后,加入装有45mL无菌水和少量玻璃珠的三角瓶中,加入0.5mL的笨酚,室温下振荡30分钟,静止5分钟,取上清液用无菌水稀释10倍。同时另取土样5g,不加热和笨酚处理,余步骤同上,作为对照。(4)用移液
2、管分别吸取原液和10倍稀释液各0.1ml标志稀释倍数的平板上,涂抹均匀,倒置,28℃培养。(5)培养10~14d,观察比较不同处理方法的生长情况、菌落特征。挑取红色,无气生菌丝的小菌落以及其它菌落形态菌株接种斜面,进一步用于形态观察和鉴定。高氏一号培养基配方:可溶性淀粉(20g),KNO3(1g),K2HPO4(0.5g),MgSO4·7H2O(0.5g),NaCl(0.5g),FeSO4·7H2O(0.01g),琼脂20g,pH=7.4-7.6(1L)关于LB培养基的问题:LB培养基的配方如下: 胰蛋白胨(Try
3、ptone)10g/L 酵母提取物(Yeastextract)5g/L 氯化钠(NaCl)10g/L 另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(LB固体培养基倒板 1.配制:100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉 2.抗生素的加入:高压灭菌后,将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中,待培养基温度降到55℃时(手可触摸)加入抗生素,以免温度过高导致抗生素失效,并充分摇匀。(抗生素怎么选) 3.倒板:一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后,打开盖子,在紫外下照10-15分钟。4.保存:
4、用封口胶封边,并倒置放于4℃保存,一个月内使用改良LB培养基:蛋白胨10g;酵母粉5g;氯化钠10g;琼脂,18g;水1000mL;调至pH7.2~7.4。
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