放线菌的分离.doc

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1、放线菌的分离（1）注意土样在用之前要风干处理20天以上，以除去大部分的细菌。（2）注意在培养基中添加重铬酸钾适量（1）取体积为300ml的高氏一号培养基，加入0.1%的重铬酸钾15mL，使之终浓度为50ppm，摇匀，倒平板，待用。（2）取土样5g，摊平于大号培养皿上，在恒温干燥箱中120℃干热处理1h。（3）土样热处理后，加入装有45mL无菌水和少量玻璃珠的三角瓶中，加入0.5mL的笨酚，室温下振荡30分钟，静止5分钟，取上清液用无菌水稀释10倍。同时另取土样5g，不加热和笨酚处理，余步骤同上，作为对照。（4）用移液

2、管分别吸取原液和10倍稀释液各0.1ml标志稀释倍数的平板上，涂抹均匀，倒置，28℃培养。（5）培养10~14d，观察比较不同处理方法的生长情况、菌落特征。挑取红色，无气生菌丝的小菌落以及其它菌落形态菌株接种斜面，进一步用于形态观察和鉴定。高氏一号培养基配方：可溶性淀粉（20g），KNO3（1g），K2HPO4（0.5g），MgSO4·7H2O（0.5g），NaCl（0.5g），FeSO4·7H2O（0.01g），琼脂20g，pH=7.4-7.6(1L)关于LB培养基的问题：LB培养基的配方如下:　　胰蛋白胨(Try

3、ptone)10g/L　　酵母提取物(Yeastextract)5g/L　　氯化钠(NaCl)10g/L　　另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(LB固体培养基倒板　　1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉　　2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。(抗生素怎么选)　　3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。4.保存：

4、用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用改良LB培养基：蛋白胨10g；酵母粉5g；氯化钠10g；琼脂，18g；水1000mL；调至pH7.2～7.4。