【精品】分离放线菌论文1

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1、一、摘要筛选放线菌是新抗研究的重要课题之一。迄今为止，已发现的抗生素有80%皆来自于放线菌。放线菌主要存在于土壤中，并在土壤中占有相当大的比例。一般地，放线菌在比较干燥、偏碱性、含有机质丰富的土壤屮数量居多。通常，随着地理分布、植被及土壤性质的不同，放线菌的种类、数量和拮抗性也各不相同。土壤是微生物的大本营，其中的放线菌多以链霉菌为主，因此人们通常将除链霉菌以外的其它放线菌统称为稀有放线菌。采用加热处理土样、选用特殊培养基或添加某种抗生素等方法时，均可提高稀有放线菌的获得率。结果表明：在此方法下可以成功培养出放线菌。二、关键词：放线菌、高氏一号培养基、预处理、抑制剂。放线菌与人类的生产和生活关

2、系极为密切，目前广泛应用的抗生素约70%是各种放线菌所产生。一些种类的放线菌还能产生各种酶制剂（蛋白酶、淀粉酶、和纤维素酶等）、维生素和有机酸等。弗兰克菌属为非豆科木本植物根瘤中有固氮能力的内共生菌。此外，放线菌还可用于笛体转化、坯类发酵、石油脱蜡和污水处理等方面。少数放线菌也会对人类构成危害，少数放线菌也会对人类构成危害，引起人和动植物病害。因此，放线菌与人类关系密切，在医药工业上有重要意义。现有的放线菌分离培养基多达30余种，放线菌资源调查待分离土样数量很大，培养基种类过多将加大分离工作量，故筛选几种出菌率高、能将土壤中绝大多数种类放线菌分离培养出的代表性培养基，可在保证获得绝大部分放线菌

3、资源信息的情况下，有效减少工作量，是当今放线菌分离的重要课题之…。此外，增加可培养放线菌数量和抑制杂菌也是建立放线菌有效分离方法面临的重大问题之一。关于放线菌的分离培养基及杂菌抑制方法我国许多研究者已进行了许多研究，但对代表性培养基的筛选、提高可培养放线菌数量及采用理化因子联合抑制杂菌的研究报道不多。放线菌在人工培养基上不生长的原因很多，例如培养基养分不能满足某些放线菌的需求导致放线菌抱子不能萌发等为了分离出更多的未知放线菌，需要不断改进分离方法，以便将传统方法不可培养的放线菌分离出来。目前，国内外在放线菌分离方法研究方面已经取得了较大的进展，可以采用多种物理、化学刺激以及改变培养基成分等措施

4、，能有效提高稀有放线菌的出菌率，并分离出放线菌的新种属。例如微波处理法分离放线菌。四、方法：1、实验材料及器材(1)、实验材料：采集的土壤材料。(2)、实验器材：微波炉、电磁炉、干燥箱、玻璃涂铲、50或100mL量筒(灭菌)、90mm培养皿(灭菌)、1或2mL移液管(灭菌)、标签纸、小玻璃珠(灭菌)、吸耳球，盖玻片等。(3)、实验试剂：可溶性淀粉、KNO3、K2HPO4•3H2O>NaCl、FeSO4・7H2O、MgSO4・7H2O、琼脂、盐酸、氢氧化钠、PH试纸、重銘酸钾。2、实验步骤(-)采样1、放线菌的特点、生境分析放线菌以抱子和菌丝片段的形式存在于土壤，每克土壤内含有数万、数十万的砲了

5、。放线菌的砲了和抱囊抱了在适宜的环境下吸收水分，膨胀萌发，生出芽管1—3个，芽管伸长长出分枝，分枝越来越多，形态菌丝体。因其菌丝体在培养基内，即基内菌丝或称营养菌丝体。基内菌丝体一般没有横隔，由丁•菌丝体长入培养基内和培养基表面，并纠缠在一起形成密集的菌落，所以用接种针将整个菌落培养基挑起而不破裂。基内菌丝体向空间长出的菌丝体叫做气生菌丝体。在显微镜下观察时，气生菌丝体颜色较深，且较基内菌丝体粗两倍左右。气生菌丝体发育到一定阶段，在它上面形成砲了丝。砲子丝形状有直、波曲、螺旋、轮生之分。螺旋有松、紧、大、小之分，其螺旋的方向也有左旋与右旋之分，大多数种为左旋，少数为右旋。螺旋的数目也是种的特征

6、之一。砲子具有不同的形状，有球形、椭球形、杆状、柱状，在光学显微镜下就能看清楚。2、采样方法：土壤中放线菌最丰富，品种齐全，在比较干燥、偏碱性、含有机质丰富的土壤数量居多。因此在此种环境随机取不同地方厚度约5——10CM处的土壤100克，其中即可有大量放线菌存在。袋装后待做进一步处理。3、样品处理：对样品进行风干、干热处理以减少细菌和真菌的数量。将上述随机取的不同土壤约100g,自然条件下风干，颜色由深变浅后碾碎，过孔径为840um（20目）的土壤筛（或人工挑取较大的右粒或土块）。用无菌的报纸将土样包好（单层），放到电热鼓风干燥箱屮，60°C干热处理lho（二）、分离1、原理：原理一，稀释涂布

7、平板法。如图：图1稀释涂平板法示意图原理二对样品进行风干、干热处理以减少细菌和真菌的数量。原理三，向培养基添加适量的重銘酸钾能抑制其他细菌、真菌的生长，但不影响放线菌的生长。2、培养基的设计高氏1号培养基：可溶性淀粉20g,KN03l.Og,K2HPO4•3H2O0.5gNaCl0.5gFeS04•7H2O0.01g,MgSO4•7H2O0.5g,pH7.2—7琼脂20g水1000mL(1)、配置