实验四-细菌、真菌、放线菌的分离和培养.doc

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1、沖沪必岁实验报告课程名称：环境微牛物学实验实验类型:综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号:同组学生姓名：扌旨导老师:实验地点：实验口期：2018年10月垃日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。为了分离获得某种微生物，需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，

2、添加链每素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重锯酸钾液或制霉素50U/mL抑制霉菌。通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混朵的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。2.平板涂布法：因为将微生物

3、悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。划线的方法很多，常见的比较容易岀现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。用途一般多用于筛选菌株。一般用于平板培养基的回收率计数。优点是

4、可以计数，可以观察菌落特征。缺点是吸收量较少，较麻烦,平板不于燥效果不好，容易蔓延。如果菌液密度天的话，长不出单菌落。4.稀释倒平板法：稀释倒平板法是将细菌与液态的培养基混合后倒入培养皿再冷却凝固，使样品中的微生物细胞充分分散开，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，单个细胞及聚在一起的细胞可以生长繁殖，形成一个肉眼可见的菌落，统计菌落数目，即可用以评价样品中的微生物的数量。所以细菌在培养基的内部和表面都有,适合厌氧型微生物。5.菌种保藏：菌种保藏是将微生物的菌种经长时间的保存，不污染其它杂菌，及可保持其形态特征和生理性状，减少变异，防止衰老，以便于

5、将来使用。保藏菌种一-般是选用它的休眠休，如抱子;芽砲等等，并且要创造一一个低温;干燥；缺氧;避光和缺少营养的环境条件，以利于休眠体能长期地处于休眠状态。对于不产砲子的微生物，应使其新陈代谢处于最低状态，又不会死亡,从而达到长期保存的目的6.菌落特征观察单细胞微生物丝状微生物细菌酵母菌放线菌霉菌菌落含水状态极湿/较湿较湿T•燥或较干燥干燥菌落外观形态多样较大较厚、圆形，边缘整齐小而致密，粉末状大而疏松，或大而致密、呈绒毛状、棉絮状、粉末状等细胞相互关系单个分散，或有一定排列方式单个分散，或假丝状丝状交织丝状交织细胞形态特征小而均匀，个别有芽抱大而分化粗而

6、分化粗而分化菌落透明度透明/稍透明稍透明不透明不透明菌落与培养基接和度不结合不结合牢固结合较牢固结合菌落颜色多样单调，一般呈乳白色或矿烛色。少数呈红色或黑色多样多样菌落正反面颜色差别相同相同i般不同一般不同细胞生长速度快较快慢较快气味一般有臭味洒香味泥腥味霉味7.微生物分离培养结果观察：在环境样品的微生物分离过程中，虽然用了不同的培养基并添加了一定的选择性抑茵物，但并不能保证牛肉膏蛋口腺培养基上长的都是细苗，启氏号培养基上长的都是放线菌，马铃薯蔗糖培养基上长的都是真茵。因此，必须对微生物的的落形态进行识别。*菌落识别：菌落特征是细胞（首丝群体形态在宏观上

7、的反映，是鉴沱各类微生物的重要形态学指标。熟悉和掌握四大类敬生物细菌、放线菌、酵母药、需菌茵落形态的特征，对于菌种识别和筛选具有重要作用。*移植：从疏离孤独的单药落中挑取培养物接种至新鲜培养慕。三、主要仪器试剂（必填）1.菌源:选定采取土样的地点后，铲去表士层（2飞cm）,収深层（3~10cm）土壤109.装入无菌牛皮袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境特征和详细日期。取回土样后，及时分离菌种，若不能及时分离,将土样保存在低温、干燥的条件下，尽可能减少菌相变化。2.培养基（10mL装）：牛肉膏蛋白腺琼脂培养基，淀粉琼脂培养基，马铃装蔗糖培养基。3.无菌水

8、:在250mL锥形瓶中，灌装45mL蒸帼水，放人10粒玻璃珠;在5~7支试管中灌