河南商品蛋鸡群马立克氏病病毒流行株的分离与鉴定-论文.pdf

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1、第35卷第1期河南科技大学学报：自然科学版VOl_35NO．12014年2月JournalofHenanUniversityofScienceandTechnology：NaturalScienceFeb．2014文章编号：1672—6871(2014)01—0067—04河南商品蛋鸡群马立克氏病病毒流行株的分离与鉴定余祖华，丁轲，滕蔓，宿靖伟，罗俊(1．河南科技大学动物疫病与公共安全重点实验室，河南洛阳471003；2．河南省农业科学院a．农业部动物免疫学重点实验室；b．河南省动物免疫学重点实验室，河南郑州450

2、002)摘要：2011年～2012年，河南省多个地区养殖场鸡群爆发了马立克氏病，应用外周血淋巴细胞培养分离技术对流行毒株分离并进行了PCR鉴定，最终分离到17个马立克氏病毒毒株，这些病毒株感染鸡胚成纤维细胞3～5d后均能形成典型的病毒蚀斑，从感染细胞总DNA中均能扩增出132bp重复序列的特异性条带，且各毒株间132bp重复序列扩增产物的拷贝数存在明显差异，分离鉴定表明：河南鸡群中可能存在不同毒力马立克氏病毒野毒株的共流行。关键词：马立克氏病病毒；分离；鉴定；132bp重复序列中图分类号：$852．65；Q78文献

3、标志码：A0引言马立克氏病(MD)是由马立克氏病毒(MDV)感染鸡引起的一种以淋巴细胞增生为特征的肿瘤性免疫抑制性传染病。MDV属于疱疹病毒，具有严格的细胞结合性。MDV有3个血清型，血清型I(MDV一1)、Ⅱ型(MDV2)和Ⅲ型(MDV．3)，其中，只有MDV一1具有致病性或致瘤性，包括对宿主具有毒力或致瘤性的强毒分离株以及它们的致弱变异株。根据致病性的不同，MDV一1野毒分离株又可以分为温和MDV(mMDV)、强毒MDV(vMDV)、超强毒MDV(vvMDV)以及超超强毒MDV(vv+MDV)-5]。MDV基因

4、组全长约180kb，主要由一个长独特序列区(UL)和一个短独特序列区(us)构成，在独特序列区两侧分别是两个序列完全相同的反转重复序列区，长末端重复序列(TRL)和长内部重复序列(IRL)或是短末端重复序列(TRS)和短内部重复序列(IRS)E6-81，MDV特异性的病毒基因主要位于反转重复序列区TR／IR中，其中，132bp重复序列、meq基因和pp38基因等与MDV致肿瘤相关1ol。MD是一种可以用疫苗进行免疫预防的肿瘤性疾病，疫苗株主要有MDV一1的CVI988／Rispens株和国内的8l4株、MDV一2的

5、SB1株及MDV一3的FC126株，这些疫苗株在MDV的l防控中发挥了重要的作用。虽然疫苗的应用能较好地预防MDV的发生，但由于MDV毒力在不断的增强，近年来在国内外疫苗免疫鸡群中仍不断有MD的发生，给养鸡业造成了严重的经济损失。。”。2011年～2012年，中原地区较大面积的疫苗免疫鸡群也发生了疑似MDV的病例，本文从这些发病鸡中分离了一些毒株，并通过对132bp重复序列的PCR扩增进行了鉴定，发现河南省鸡群中可能流行着不同毒力的MDV。1材料和方法1．1材料1．1．1病料：采集自河南省6地区MD疑似病例鸡场。1

6、．1．2无特定病原体(SPF)鸡胚：购于济南斯帕法斯家禽有限公司。1．1．3毒株：GX0101vvMDV株，由山东农业大学动物医学院崔治中教授馈赠。1．1．4试剂：PremixExTaq、UniversalGenomicDNAExtractionKitVer．3．0，均购自宝生物工程(大连)有限公司。琼脂糖凝胶回收试剂盒，购白天根生化科技(北京)有限公司。基金项目：国家自然科学基金面上项目(31072145，31372445)作者简介：余祖华(1977一)，女，河南商城人，讲师，博士，主要从事动物传染病与免疫学研究

7、收稿日期：2013—09—11·70·河南科技大学学报：自然科学版2014正[4]WitterRL．IncreasedVirulenceofMarek’SDiseaseVirusFieldIsolates[J]．AvianDis，1997，4l(1)：149—163．[5]WitterRL，CalnekBW，BuscagliaC，eta1．ClassificationofMarek’sDiseaseVirusesAccordingtoPathotype：PhilosophyandMethodology[J]．Avi

8、anPathol，2005，34：75—90．[6]LeeLF，WuP，SuiD，eta1．TheCompleteUniqueLongSequenceandtheOverallGenomicOrganizationoftheGAStrainofMarek’SDiseaseVirus『J]．PNAS，2000，97(11)：6091—6096．[7]Tuhna