氯化钙制备感受态细胞.doc

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1、氯化钙法（兴湘）制备感受态细胞什么是感受态细胞？感受态细胞（competentcell）：理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。氯化钙法（兴湘）制备感受态细胞的原理？细菌处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促使细胞吸收DNA复合物。钙离子的作用是结合于细胞膜上，是细胞膜呈现一种液晶态。在冷热变化刺激下液晶态的细胞膜表面会产生裂隙，使外源DNA进入。影响感受态细胞制备的因素有哪些？1．细菌的生长状态：实验中应密切注

2、视细菌的生长状态和密度，尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制。DH5α菌株OD600为0.5时细胞密度是5×107/ml）。2．所有操作均应在无菌条件和冰上进行。3．经CaCl2处理的细胞，在低温条件下，一定的时间内转化率随时间的推移而增加，24小时达到最高，之后转化率再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）。4．化合物及无机离子的影响：在Ca2+的基础上联合其他二价金属离子（如Mn2+或Co2+）、DMSO或还原剂等物质处理细菌，可使转化效率大大提高（100-1000倍）。5．所使用的器皿必须干净。迹量的去污剂或其它化

3、学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率。6．质粒的大小及构型的影响：用于转化的应主要是超螺旋的DNA。7．一定范围内，转化效率与外源DNA的浓度呈正比感受态细胞制备中，加了两次氯化钙，它们的作用分别是什么？除了增加细胞通透性之外，第一次还有洗净之前一步残留的LB液体的作用。亲爱的用户：烟雨江南，画屏如展。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，感谢你的阅读。1、最困难的事就是认识自己。21.10.410.4.202116:2416:24:12十月-2116:242、自知之明是最难得的知识。二〇二一年十月四

4、日2021年10月4日星期一3、越是无能的人，越喜欢挑剔别人。16:2410.4.202116:2410.4.202116:2416:24:1210.4.202116:2410.4.20214、与肝胆人共事，无字句处读书。10.4.202110.4.202116:2416:2416:24:1216:24:125、三军可夺帅也。星期一,十月4,2021十月21星期一,十月4,202110/4/20216、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。4时24分4时24分4-十月-2110.4.20217、人生就是学校。21.10.421.10.421

5、.10.4。2021年10月4日星期一二〇二一年十月四日8、你让爱生命吗，那么不要浪费时间。16:2416:24:1210.4.2021星期一,十月4,2021