基因工程的基本操作步骤4.ppt

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1、1.2基因工程的基本操作程序基因工程基本操作的四个步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取1、目的基因主要是指______________________编码蛋白质的结构基因也有一些具有调控作用的因子2、获取目的基因的方法（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增（3）人工合成________________________________________(一)从基因文库中获取目的基因1.基因文库将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，

2、称为基因文库。2.基因文库的分类:种类基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库基因文库的构建过程限制酶拼接到载体上导入受体细胞扩增通过对受体菌群体的培养而储存一种生物的全部基因。基因组文库3.基因文库的构建方法提取生物某发育时期的mRNA单链DNA逆转录酶DNA聚合酶双链CDNA(只含该生物部分基因)与载体连接导入到受体菌群储存cDNA文库基因组文库和cDNA文库比较原核细胞的基因结构(补充内容）非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子①不编码蛋白质。：编码蛋白质,连续不间断编码区非

3、编码区原核细胞的基因结构②调控遗传信息表达,上游有启动子，下游有终止子启动子真核细胞的基因结构（补充内容）编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子启动子终止子编码区上游编码区下游真核细胞的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用,上游有启动子，下游有终止子非编码序列：包括非编码区和内含子原核细胞与真核细胞的基因结构比较思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续不连续编码区非编码真核生物mRNA的形成编码区非编码区RNA聚合酶结合位点非编码区转录加工（剪切、拼接）成熟mRNA只对

4、应外显子部分初级转录物补充资料基因组文库和cDNA文库比较依据：目的基因的有关信息如：根据基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性4.从基因文库中得到目的基因的方法①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术③条件：___________、_______________、___________、___________、__________②原理：__________聚合酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制模板DNA四种脱氧核苷酸DNA引物热稳定DNA

5、聚合酶（二）利用PCR扩增目的基因④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）⑤结果：_______________________________________________________指数2n使目的基因的片段在短时间内大量扩增⑥过程a、变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、复性（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链⑦前提_____

6、_____________________________________________有一段已知目的基因的核苷酸序列蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测目的基因化学合成（DNA合成仪）（三）人工合成若基因_____，核苷酸序列______，可用此法。较小已知（化学合成法）mRNAcDNA单链cDNA分子逆转录酶DNA聚合酶（三）人工合成（反转录法）与直接提取的DNA相比cDNA不含有_____和_____等结构。真核生物mRNA的形成编码区非编码区RNA聚合酶结合位点非编码区转录加工（剪切、拼接）成熟mRNA只对应外显子部分初级转录物补

7、充资料a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代b、同时使目的基因能表达和发挥作用1、基因表达载体的构建目的二、表达载体的构建2、基因表达载体的组成：目的基因标记基因启动子终止子启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来①用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。