化学因素对微生物的影响.ppt

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1、化学因素对微生物的影响水生态工程实验室－YJH目的要求了解常用化学消毒剂对微生物的作用。学习测定石炭酸系数的方法。基本原理常用化学消毒剂重金属及其盐类有机溶剂（酚、醇、醛）卤族元素及其化合物染料表面活性剂各种化学消毒剂的杀菌能力常以石炭酸为标准，以石炭酸系数（酚系数）来表示。将某一消毒剂作不同程度稀释，在一定时间内及一定条件下，该消毒剂杀死全部供试微生物的最高稀释倍数与达到同样效果的石炭酸的最高稀释倍数的比值，即为该消毒剂对该微生物的石炭酸系数。石炭酸系数越大，说明该消毒剂杀菌能力越强。器材菌种：大肠杆菌，白色葡萄球菌。培养基：

2、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，牛肉膏蛋白胨液体培养基。溶剂或试剂：各种化学消毒剂仪器或其他用具：无菌培养皿，无菌滤纸片，试管，吸管，三角涂棒等。操作步骤滤纸片法石炭酸系数的测定user:滤纸片法1、倒平板2、标记3、细菌涂布4、放滤纸片5、培养及结果观察石炭酸系数测定稀释配制石炭酸溶液稀释配制待测消毒剂溶液配制分装培养基消毒剂作用细菌培养计算石炭酸系数值倒平板在微波炉中加热将灭好菌的固体培养基融化，待冷却至55～60°C时，右手持装有培养基的三角瓶置酒精灯火焰旁，用左手将瓶塞轻轻拔出，瓶口对着火焰；用右手小指和手掌边缘或小指与无名指夹

3、住瓶塞，左手拿培养皿并将皿盖在酒精灯火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15mL，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布。标记将平板底皿划分成4-6等份，每一份内标明一种消毒剂名称。消毒剂1消毒剂2消毒剂3消毒剂4消毒剂5消毒剂6消毒剂7消毒剂8生理盐水生理盐水细菌涂布用无菌吸管吸取0.2ml菌液接种在作好标记的琼脂平板上，再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀。放滤纸片用无菌镊子将已经灭菌的小园滤纸片（5mm）分别浸入各种消毒剂溶液中。无菌操作取出浸湿的小滤纸片，并在试管内壁沥去多余药液，注意保证滤纸片上各种消毒剂溶液量基本一致。

4、无菌操作将滤纸片贴在上述平板的相应区域。培养及结果观察将上述贴好滤纸片的平板置于37℃培养箱中培养，24hr后取出观察抑（杀）菌圈的大小。抑（杀）菌圈的大小测定：稀释配制石炭酸溶液将石炭酸溶液稀释成1/50、1/60、1/70、1/80、1/90等5种浓度，每个浓度各取5mL装入试管，作好标记。稀释配制来苏尔溶液将来苏尔溶液稀释成1/150、1/200、1/250、1/300、1/500等5种浓度，每个浓度各取5mL装入试管，作好标记。配制分装培养基取盛有牛肉膏蛋白胨液体培养基的试管15支，标记石炭酸的5种浓度，每个浓度标记3支

5、，分别标记5、10、15min三个作用时间。另取盛有牛肉膏蛋白胨液体培养基的试管15支，标记来苏尔的5种浓度，每个浓度标记3支，分别标记5、10、15min三个作用时间。消毒剂作用细菌在上述盛有不同浓度的石炭酸和来苏尔溶液的试管中各加入0.5mL大肠杆菌菌液摇匀。加入大肠杆菌后分别于5、10、15min用接种环自每管内取一环混合液接种到分装并作好标记的牛肉膏蛋白胨液体培养基试管内。培养将上述接种药液处理过的大肠杆菌的试管置于37℃培养箱中培养48hr后观察并记录大肠杆菌生长状况。细菌生长试管内培养液混浊，以“+”表示，不生长试管

6、内培养液澄清，以“-”表示。计算石炭酸系数值找出将大肠杆菌在药液中处理5min后仍能生长，而处理10min和15min后不生长的来苏尔及石炭酸的最大稀释倍数，计算二者比值。消毒剂稀释倍数大厂杆菌生长状况石炭酸系数5min10min15min石炭酸50＋＋＋60＋＋＋70-＋＋80--＋90---来苏尔150＋＋＋250/70=3.6200＋＋＋250-＋＋300--＋500---