理化因素对微生物的影响.ppt

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1、实验十理化因素对微生物的影响一.实验目的掌握物理、化学因素抑制或杀死微生物的作用及其试验方法。二、实验原理采用强烈的理化因素使任何物体内外所有的微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施称为灭菌。用较温和的物理或化学方法杀死物体上绝大多数微生物的方法称为消毒。微生物广泛存在于周围环境中，消毒灭菌主要是通过理化因素使微生物的主要代谢发生障碍，或菌体蛋白质变性凝固，或破坏其遗传物质，导致微生物死亡。三、主要器材1.　活材料：培养24h的大肠杆菌或葡萄球菌、沙门氏菌及枯草杆菌、丙酮丁醇梭菌斜面菌种。2.　培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、无菌水、药敏片（1g/LHgCl2，0.2mg/L链霉

2、素，0.2mg/L青霉素，50g/L石炭酸，或其它种类消毒剂、抗生素）。3.　器材：无菌培养皿、无菌三角玻棒、无菌圆形黑纸片、无菌吸管、镊子、恒温培养箱、玻璃刮铲、高压灭菌器。四、操作步骤（一）紫外线对微生物的影响将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作制成平板，用无菌移液管吸取0.1mL大肠菌液涂布于平板上（用无菌三角玻棒）。在无菌室中，将无菌圆形牛皮纸片放置于平板，在距离紫外灯的30cm处照射20min，去牛皮纸加皿盖（如图）。于37℃温箱中倒置培养24h后记录结果。（二）氧对微生物的影响1.取4支牛肉膏蛋白胨培养基试管于水浴中加热融化。2.待培养基冷至45℃左右，按无菌操作分别接种

3、大肠杆菌、枯草杆菌、丙酮丁醇梭菌各一环，对照管不接种，搓动混匀。3.将试管直立于28℃培养，48h后开始连续观察几天，直至结果清晰，记录结果。（三）化学药剂对微生物的影响1.　制平板：取无菌平皿，将已溶化并冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作法倒入平皿中，使之冷凝成平板。2.　制备菌悬液：取无菌水，用接种环取菌种1～2环接入无菌水中，充分摇匀，制成菌悬液。3.接种：用无菌吸管吸取已制好的菌悬液0.1ml接种于平板上，用无菌玻璃刮铲涂匀。4.加药剂：用无菌镊子将浸过药液滤纸片分别平铺于含菌平板上，注意纸片放好后不要移动，并在平皿背面做好标记。5.培养：将平皿置于37℃下

4、培养24h观察结果。化学药剂对微生物的影响试验示意图五、实验报告（一）实验结果1.将紫外线对微生物的影响试验结果绘图表示。2.氧对微生物的影响的测定结果记录于表中。3.比较化学药剂对微生物的影响试验结果透明圈的大小。氧对微生物的影响（二）思考题1.含化学消毒剂的滤纸片周围形成的抑（杀）菌圈表明该区域培养基中的原有细菌被杀死或被抑制而不能进行生长，你如何用实验证明抑（杀）菌圈的形成是由于化学消毒剂的抑菌作用还是杀菌作用？2.某公司推出一种新型饮料，被声称是100%纯天然产品，不含防腐剂，利用你所掌握的微生物学知识，试设计一个简单实验来初步判断此饮料是否含防腐剂。六.　注意事项1.制备

5、平板培养基厚度要均匀，指示菌涂布要均匀，使细菌分散、均匀；2.纸片形状、大小要一致，不能在培养基表面拖动；3.药剂标记要准确，避免混乱。