PTTG、VEGFC 的表达及微淋巴管密度与非小细胞肺癌临床病理特征的关系.doc

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1、PTTG.VEGFC的表达及微淋巴管密度与非小细胞肺癌临床病理特征的关系作者：尹秋伟郭旭峰胡国强赵健李希波【摘要】目的检测非小细胞肺癌（nonsmallcelllungcancer,NSCLC癌旁组织及肺良性病变组织中垂体瘤转化基因（pituitarytumortransforminggene,PTTG)及血管内皮生长因子C(vascularendothelialgrowthfactor,VEGFC)的表达和微淋巴管密度(lymphaticmicrovesseldensity,LMVD)值，并探讨三者间的相互关系。方法应用实时荧光定量PCR和免疫组织化学方法检测非小细胞

2、肺癌组织中PTTG、VEGFCmRNA和蛋白及LMVD的表达，分析PTTG、VEGFC及LMVD与NSCLC临床病理特征的关系，以及PTTG、VEGFC和LMVD三者之间的相互关系。同时，对随访资料进行生存分析，绘制生存率曲线，探讨PTTG、VEGFC对肺癌患者预后的影响。结果PTTG、VEGFCmRNA和LMVD值在不同性质的肺病变组织中的表达均有显著性差异（P均＜005）,在不同年龄、性别、是否吸烟、肿瘤大小、组织学类型及分化程度间无显著性差异（P均＞005）,在TNM分期、淋巴结转移与否及预后组间有显著性差异（P均v005）oPTTG、VEGFC蛋白表达在淋巴结转移

3、与否及预后组间有显著性差异(P均V005)。生存率曲线显示PTTG、VEGFC高表达者生存时间均短于低/无表达者(P=0030,0027,n=65)oPTTG在肺癌组织中的表达与VEGFC、LMVD密切相关，随着PTTG强度增加，VEGFC分级及LMVD值亦增加。结论PTTG、VEGFC的过度表达促使肿瘤微淋巴管的生成，进而促进了肿瘤细胞淋巴结转移。PTTG和VEGFC表达可作为判断NSCLC生物学行为及肺癌患者预后的良好指标，VEGFC有望成为肺癌抗淋巴管治疗的新靶点。【关键词】垂体瘤转化基因；血管内皮生长因子C;微淋巴管密度；实时荧光定量PCR垂体瘤转化基因(PTTG

4、)是1997年〔1〕被发现并证实与细胞增殖、分化和凋亡有关的癌基因。血管内皮生长因子(VEGF)C被认为是迄今发现的唯一特异性新生淋巴管刺激因子，可促进肿瘤微淋巴管生成及肿瘤细胞向区域淋巴结转移。有研究〔2〕显示PTTG可通过促进VEGFC的过度表达，促使肿瘤细胞发生淋巴结转移。国内外已报道PTTG在食管癌、胃癌和卵巢癌等多种肿瘤中高表达，但目前尚未见对PTTG在肺癌中表达研究的报道。以往关于VEGFC的研究多为蛋白半定量分析，本实验结合免疫组化应用实时荧光定量PCR对非小细胞肺癌(NSCLC)组织中PTTG、VEGFC的表达进行精确定量分析，并检测微淋巴管密度(LMVD

5、)的表达情况，旨在探讨它们与NSCLC临床病理特征及预后的关系。1材料与方法11研究对象收集65例NSCLC组织，均来自手术切除且经病理科常规病理学检查证实。男:女为40:25,年龄43-78（中位数588）岁。依据1997年新的修订标准进行TNM分期，其中

6、期7例，II期28例，山期26例，IV期4例；按病理形态学分为鳞状细胞癌36例，腺癌26例，大细胞癌3例；按分化程度分为高分化5例，中分化18例，低分化42例；按有无淋巴结转移分为有淋巴结转移37例，无淋巴结转移28例。所有患者均为原发性NSCLC,术前均未接受过化疗或放疗等任何治疗。同时取65例配对的癌旁组织和20

7、例肺良性瘤样病变组织（包括结核球10例，错构瘤4例，炎性假瘤4例，肺纤维组织细胞瘤1例，肺隐球菌感染1例）。癌旁组织为距肿块边缘5cm以上的正常组织。肺癌组织和肺良性病变组织均取自肿块中央非坏死部分。标本经10%甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋。65例患者无住院期间死亡，随访日期以患者手术日期起计算术后随访至XXXX年5月。RNAisoReagent.SYBRExScriptTMRTPCRKit(DRR053S)均购自TaKaRa公司，引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，其他各种化学试剂均为进口或国产分析纯。采用ABIPRISM7000实时PCR扩增仪。兔抗人多克隆抗

8、体PTTG、VEGFC、VEGFR3及免疫组织化学试剂盒PV9000均购自北京中山生物技术公司。13实验方法131实时荧光定量1311总RNA的提取每100mg组织匀浆后,加入TRIzolReagent1ml,然后加入02ml氯仿，离心后吸取上清，加入05ml异丙醇，离心沉淀后弃上清，75%乙醇洗沉淀，DNaseI酶解可能残余的基因组DNA。RNA溶于DEPC水，甲醛变性凝胶电泳，分光光度计检测浓度和纯度。1312cDNA的合成反转录仪为GeneAmpPCRSystem9700(AppliedBiosystems公司)。采用1