色谱色谱复习.docx

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1、第二章色谱法的基本术语及理论1.色谱峰展宽的因素（19-20）一．柱内因素VanDeemter曲线方程：H=A+B/u+Cu1）涡流扩散项AA=2λdp（λ为柱填充不规则因子，dp为填充物的平均颗粒直径）A项说明由于柱子填装的不均匀或填料颗粒直径不均匀，流动相流过时就会由于流速不同引起涡流现象，导致分析物被扩散，谱带展宽，即色谱峰形展宽。2）纵向扩散项（分子扩散项）B/uB/u=2γDm/u（B为纵向扩散项常数，Dm为样品组分在流动相中的扩散系数，γ为弯曲因子）纵向扩散项说明试样分子在色谱柱内被流动相带向前时

2、，由分子本身运动引起的轴向扩散也会引起峰展宽。①流动相中的扩散系数Dm。Dm与组分的性质、流动相的性质、温度、压力等有关。在u较低的情况下B项对谱带展宽的影响增加。气相>液相。解决方法：a）气相：增加载气密度，既增加压力及载气分子量。常用氮气。b）液相：若u>1cm/s，则B项可忽略②弯曲因子γ。与填充物的形状、填充状况有关。毛细管柱γ=1.③流动相速度。U下降，B项增加，峰展宽。3）传质阻力项CuCu=Csu+Cmu（Cs为流动相中的传质阻力，Cm为固定相中的传质阻力）①填充柱气相色谱：一般情况下Cm可忽略

3、不计。C=Cs②毛细管柱气象色谱：C=Cs+Cm③液相色谱：C=Cs+Cm+Csm（Csm静态流动相传质阻力）当流动相小于最佳流速时，流速越小B/u项越大，Cu项越小，此时B/u项主导作用，流速增加，H减小柱效增高。但流速大于最佳流速时，流速越大，B/u项越小，Cu项越大，此时Cu项起主导作用，流速增加，H增加，柱效降低。u最佳=（B/C）1/2。实际采用u>u最佳。提高柱效：减少填充粒径、提高填料粒径的均匀度和圆整度、提高填料均匀性、提高色谱柱内表面的光滑度和内劲的均匀性、减少固定相液膜厚度和提高固定液膜涂

4、布的均匀性。二．柱外因素：进样器、检测器和各种连接管中的死体积，以及溶剂效应、进样方式和技术降低柱外效应对板高的影响：1.尽量减少连接管线的长度，并采用细内径的管线为连接线；2.采用死体积小的检测器；3.避免溶剂效应；4.采用合适的进样方式和技术。2.分离度的影响因素（23）影响分离度R大小的因素：R=√n4（α-1α）（k1+k）1）√n4称为柱效项，（α-1α）称为柱选择项，（α=k2/k1k1，k2分别为两待分离组分的容量因子，α>1，k2>k1），（k1+k）称为柱容量项（k为相邻两组分中保留时间长的

5、组分的容量因子，即k2）。柱效项与理论塔板数有关，柱选择项与容量项有关。改善分离的一般原则：1）增加相邻组分保留时间的差值①增加色谱柱长②增加固定相的量：则k增加③选择分离因子较大的色谱条件：a降低柱温，b选择不同的固定相（填充柱GC），c选择不同的流动相（HPLC）2）减少谱带宽度W①提高柱效，减少塔板高度——使用粒径更细的填料，匀浆装柱②减少色谱系统死体积③减少进样量，防止超载第三章气相色谱法1．了解气相色谱法的特点及分类（26-28）1）气相色谱法的特点：效能高、灵敏度好、选择性高、分析速度快、应用范围

6、广。2）气相色谱法的分类：填充柱气象色谱、毛细管气象色谱。2.气象色谱的固定液1）对固定液的要求（29）①化学稳定性好，在操作柱温下不降解；②化学惰性，不与样品组分、担体、柱材料及载气发生不可逆反应；③蒸气压低；④对样品组分具有一定溶解度；⑤对样品组分具有良好的选择性；⑥对担体要有湿润性。2）样品组分与固定液之间的分子作用力的种类：定向力、诱导力、色散力、特殊作用力。3）固定液的极性与分离特性评价，主要掌握Rohrschneider常数，了解McReynolds常数Rohrschneider常数：规定角鲨烷的

7、相对极性为0，β，β’-氧二丙腈的极性为100.固定液的相对极性P=100-100*（q1-qx）/（q1-q2）。（q1，q2，qx分别为物质在β，β’-氧二丙腈，角鲨烷及待测固定液的相对极性）。从0到100每20为一级，用+表示。不能反映出样品组分与固定液之间的全部作用力，只能反映色散力和诱导力。（30）McReynolds常数：（30-31）4）固定液的分类，掌握几种常见固定液如聚二甲基硅氧烷类、聚苯基甲基硅氧烷类、氰烷基聚硅氧烷类和聚乙二醇的特点及使用分析对象（32-38）非极性固定液（相对极性为0）

8、弱极性固定液（SE-30，OV-1，OV-17，相对极性为++）、中极性固定液（QF-1/OV-225，相对极性为+++）、强极性固定液（聚乙二醇、聚酯类，相对极性为++++或+++++）①聚二甲基硅烷类（最广泛）：可使用的温度范围大，对一般的有机化合物有较好的溶解能力。在操作条件下，蒸汽压低，热稳定性和化学稳定性好，还可以在硅原子上引入多种有机官能团，改变其性质。在高温下，强酸、强碱和氧气能使硅氧