薄层色谱、柱色谱及凝胶色谱法+

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1、薄层色谱、柱色谱及凝胶色谱法金敬杰色谱法概述1发展历史俄国生物学家茨维特(Tswett)首先提出来的。1903年，Tswett柏林会议上宣读了他的研究成果。1906年，正式发表。样品：植物色素的石油醚提取液。柱：CaCO3(固定相）洗脱剂：纯石油醚（流动相）。结果：有色谱带出现。实验方法：如图（1-1）所示：石油醚玻璃管CaCO3(粉末）….….…..::…..…..……..………..图1色谱1919Tswett逝世，当时他的方法并未引起注意。1931R.kuhn（库恩）用该法成功分离了胡萝卜素

2、和叶黄素。1938R.kuhnObtainNoblePrise.1943R.kuhn发明了离子交换色谱。1944英国的Martin.J.P和Synge.R.L发明了纸色谱。1948TiselIus（瑞士）发明了电泳和吸收分析。1952英国的MartIn.J.P和Synge.R.L又发明了液相色谱。1956Van.Decemter提出了填充柱速率理论:H=A+B/u+CuStahl发明并完善了薄层色谱。Flodin发明了凝胶色谱。1958Golay发明了毛细管色谱；氢火焰离子检测器。1969Kir

3、kland提出了表面孔度担体的新型填料。Hermun研制成第一条高效液相色谱仪。1975H.Small离子交换柱1979D.T.GjerdeandJ.S.Fritz非抑柱的单柱离子色谱.总之：1956Van.Deemter：柱速率理论。Flodin：凝胶色谱理论。Stahl：薄层色谱。再加上1943年发明的离子交换色谱，使色谱学这门科学开始成为一门独立的学科。2基本原理：色谱法是一种物理分离方法，即利用不同物质在两相(固定相和流动相)中具有不同的分配系数(或吸附系数、渗透性等)，当两相作相对运动

4、时，这些物质在二相中反复多次分配，从而使各物质得到完全的分离。3分类：①按固定相和流动相的物态可分为：气相色谱法、液相色谱法;②固定相的操作方式及形状分类为：柱色谱、纸色谱、薄层色谱；③以分离机制分类为：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、排阻色谱（凝胶色谱）、亲和色谱表1-1色谱法的分类流动相气体液体固定相液体固体液体固体吸附剂健合固离子交换凝胶定相树脂固定相外型柱柱柱平面平面柱柱柱柱气液气固液液薄层色谱液固健合离子交凝胶名称色谱色谱色谱纸色谱色谱相色谱换色谱色谱GSCLLCTCLLSCBPLC

5、ICGPCPCGLC1.3几种分析方法比较色谱　光谱电化学化学法分离能力强弱弱一般定性弱强一般强定量强中弱中一般分析速度快快较快慢分析范围常量、微量微量常量、微量常量发射光谱原子吸收光谱Me、无机物无机分析对象有机（无机）吸收光谱、有机、少部分有机物（有机）无机物大部分特效性一般强一般弱Me无机物结论：色谱法的分离效能是红外光谱、核磁和质谱所不及的,而且一般来说色谱法的灵敏度要比红外光谱高。色谱法有一个非常大的弱点，就是在缺乏标准样品的,情况下定性比较困难。而质谱法可以测定未知物的分子量,核磁可

6、以测定分子结构，红外光谱法可以测定分子中的官能团，这是色谱法所不及的。以上看出，色谱定性困难（缺乏标样下），而质谱（MS)测未知物分子量核磁（NMR)测分子结构红外光谱（IR)测分子中的官能团色谱、质谱、光谱、联用，取长补短，发展迅速、发挥更大的作用。1薄层色谱薄层色谱又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固-液吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加

7、大，因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。此外，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”。1.1层析原理：利用吸附剂（硅胶、氧化铝等）对不同组分吸附能力的差异从而达到分离目的的方法。1.2薄层层析的作用（1）分离（0.5g以下）（5）确定组分数（2）柱层析的先导（6）定性鉴定（3）其他分离手段的效果检测（7）粗略比较含量（4）监控反应1.3薄层层析的器材选择1.3.1基板：玻璃、塑料、金属箔1.3.2吸附剂：（1）种类

8、：常用：氧化铝（强极性）、硅胶（中强极性）不常用：硅藻土、纤维素、糖类、活性碳（2）符号：H——无任何添加剂；G——加有锻石膏（Gypsum，CaSO4·1/2H2O）粘合剂；F——加有荧光素（Fluorescein）CMC——加有羧甲基纤维素钠（3）粒度：颗粒的大小，表示方法有两种：目：1cm2内的筛孔数，数目越大，颗粒越小。薄层所用吸附剂颗粒较细，氧化铝为200目，硅胶为100~150目。（4）活性：吸附剂按其含水量的多少各分为五个等级,I级含水量最少，活性最高；V级含水量最多，活性最低；但